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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物电泳调低啊异常
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丸子龙

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物电泳调低啊异常

PCR后电泳条带异常，请大家帮忙分析一下可能原因，谢谢啦！
W$V}OQOZ({WZ61]N@C$4GG4.jpg(12.87KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DYEHDi-tUAQA4c2?p=130497
反应条件如下：
95℃： 1min
98℃： 10s
梯度56℃、58℃、60℃：15s
72℃：2min30s
30cycles
72℃  7min

[ Last edited by 丸子龙 on 2013-1-9 at 16:49 ]
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1楼 2013-01-09 16:46:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上面那么亮是模板加多了吧，对模板定量了吗？一般PCR的模板用量在电泳时看不到的。此外，目的片段多大，用的什么酶？退火时间可以延长到30-45秒。
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2楼2013-01-10 07:23:55
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419893334

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有可能模板太多；有可能引物设计不合理；有可能核酸提取有问题，杂质太多，或是已经降解
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3楼2013-01-15 15:20:42
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navy132

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你使用什么做的模板？我以前也遇到过这种情况，有可能是PCR反应的酶在反应过程中变性，造成的。你的片段多大，可以试着缩短延伸时间或者调低你的变性温度。98度，个人觉得太高了。
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4楼2013-02-15 21:17:21
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