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guoxinkun1

金虫 (初入文坛)

[求助] 求助啊,PCR高手求解啊....

我用rtaq酶p我的目的产物,条带大小都对,就是很细,弯弯的像月牙,也没法回收,这是哪个环节出了问题,求助啊,我可能说不清楚,所以截了两张图...谢谢啊..



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勇往直前
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回帖置顶 ( 共有1个 )

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助,热心的虫虫 2012-08-07 15:39:47
amisking: 回帖置顶 2012-08-09 19:48:40
如果你PCR环节没有出现问题的话,那么有可能就是跑胶的环节的问题了。
看你旁边的MARKER,条带也比较暗,是否可以适当的增加上样量。或者在配胶的时候EB适当的多加一些。
至于你跑出来的条带异常像月牙,原因有很多啊。。。有可能是,上样量过大或过小;核酸样品纯度差,含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份;电泳缓冲液未完全浸没凝胶;电压过高或电泳时间过长致使凝胶过热和DNA变性;凝胶中加入EB造成染色不均;凝胶中有气泡或污染物;点样孔质量差……
5楼2012-08-07 11:14:05
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普通回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-07 15:39:25
能否可以上传完整的图?结果是就它一条带,还是有许多的杂带?
还有你的程序是怎么设置的?
你可以做一个温度梯度,在引物的TM左右5度的样子,多P几管试试。
2楼2012-08-07 08:53:10
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guoxinkun1

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-08-07 08:53:10
能否可以上传完整的图?结果是就它一条带,还是有许多的杂带?
还有你的程序是怎么设置的?
你可以做一个温度梯度,在引物的TM左右5度的样子,多P几管试试。

旁边的是maker,没有咋带,就是我的目的条带,我的退火温度就是低5到6度啊,
勇往直前
3楼2012-08-07 10:45:58
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况我之前常遇到过,应该是你做的胶的问题或电泳液是不是该换了。还有制胶的TAE重新换一下吧~
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
4楼2012-08-07 10:49:07
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wq123good

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流将有 2012-08-07 15:39:59
建议多加点电泳液,确保胶完全浸没,还要确保上样孔中没有气泡,电压可以低一点,慢慢跑
感觉你PCR的过程没有问题,可以把上样量降低一点
过好每一天
6楼2012-08-07 11:18:28
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-08 14:21:11
PCR没问题,跑胶的问题。一是减少上样量和核酸染料使用量,然后跑电压低一点,时间短一点;二是如果做胶回收可以考虑先电泳后染色。
最好自己重新配新的电泳缓冲液来用。
为什么
7楼2012-08-07 16:51:09
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世界前沿

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个问题很简单。你电泳时找一个专门回收的电泳槽。我可以帮你回收。可联系我,邮箱:niceone02@163.com
8楼2012-08-07 17:23:47
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
调低电泳电压,增加点样量,如果要回收的话尽量多点点样品。
9楼2012-08-07 19:12:59
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这不是PCR的问题,这是电泳的问题。
10楼2012-08-07 19:39:50
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