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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR实验问题求解
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速雅婷

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR实验问题求解

亲们, PCR技术做DNA分子扩增的实验时应该注意些什么细节，实验才更容易成功？
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1楼 2011-09-19 15:37:12
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1949stone: 是滴 实践出真知 2011-09-19 19:37:50
你先做了，然后把遇到的问题和大家探讨才有针对性，如果非得说什么细节，那网上的资料一大堆
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2楼2011-09-19 16:19:04
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 很热心，很活跃 2011-09-19 18:00:57
1.加各溶液的量一般都是微量，应确定把每个样都加进去
2.扩增的条件，引物不一样，条件也不一样，可以自己摸索
3.加完样后应混匀后稍离心，再PCR扩增
    不知道对你有没有用
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3楼2011-09-19 17:23:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

额。。。。新手建议看分子克隆。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-09-19 19:01:24
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王南洲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1949stone(MolEPI+1): 很好啊 2011-09-19 19:40:17
1、先将除了cDNA以外的所有溶液混加在一个大管里用漩涡振荡器混匀（之后再分装），个人不建议离心，因为容易使密度大的样沉淀下去导致分装不均匀，分装好后再每一个小管都要离心
2、一定记住不要漏加某个样
3、引物退火温度的计算引物单上应该有，或者上网查，这个比较简单
4、加cDNA时一定要注意尽量准确！特别是做半定量，调actin时，那样做出来的结果才更有可信度嘛（实验室条件允许的话，用进口的枪头最好啦，国产的枪头有的时候就1、2微升吸得时候都会有很大误差，而且是肉眼可见的)
希望能帮到你
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5楼2011-09-19 19:08:19
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xmckyltwx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.应该注意一定要混匀
2.注意不要污染
3.条件的摸索
4.多种方法比较
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成功的起点是坚信，成功的终点是坚持~~
6楼2011-09-20 08:29:06
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