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速雅婷

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR实验问题求解

亲们, PCR技术做DNA分子扩增的实验时应该注意些什么细节,实验才更容易成功?
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

1949stone: 是滴 实践出真知 2011-09-19 19:37:50
你先做了,然后把遇到的问题和大家探讨才有针对性,如果非得说什么细节,那网上的资料一大堆
2楼2011-09-19 16:19:04
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 很热心,很活跃 2011-09-19 18:00:57
1.加各溶液的量一般都是微量,应确定把每个样都加进去
2.扩增的条件,引物不一样,条件也不一样,可以自己摸索
3.加完样后应混匀后稍离心,再PCR扩增
    不知道对你有没有用
3楼2011-09-19 17:23:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

额。。。。新手建议看分子克隆。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-09-19 19:01:24
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王南洲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1949stone(MolEPI+1): 很好啊 2011-09-19 19:40:17
1、先将除了cDNA以外的所有溶液混加在一个大管里用漩涡振荡器混匀(之后再分装),个人不建议离心,因为容易使密度大的样沉淀下去导致分装不均匀,分装好后再每一个小管都要离心
2、一定记住不要漏加某个样
3、引物退火温度的计算引物单上应该有,或者上网查,这个比较简单
4、加cDNA时一定要注意尽量准确!特别是做半定量,调actin时,那样做出来的结果才更有可信度嘛(实验室条件允许的话,用进口的枪头最好啦,国产的枪头有的时候就1、2微升吸得时候都会有很大误差,而且是肉眼可见的)
希望能帮到你
5楼2011-09-19 19:08:19
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xmckyltwx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.应该注意一定要混匀
2.注意不要污染
3.条件的摸索
4.多种方法比较
成功的起点是坚信,成功的终点是坚持~~
6楼2011-09-20 08:29:06
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