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guoxinkun1

金虫 (初入文坛)

[求助] 求助啊，PCR高手求解啊....

我用rtaq酶p我的目的产物，条带大小都对，就是很细，弯弯的像月牙，也没法回收，这是哪个环节出了问题，求助啊，我可能说不清楚，所以截了两张图...谢谢啊..
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勇往直前
1楼 2012-08-06 22:39:05
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-07 15:39:25
能否可以上传完整的图？结果是就它一条带，还是有许多的杂带？
还有你的程序是怎么设置的？
你可以做一个温度梯度，在引物的TM左右5度的样子，多P几管试试。
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2楼2012-08-07 08:53:10
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guoxinkun1

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-08-07 08:53:10
能否可以上传完整的图？结果是就它一条带，还是有许多的杂带？
还有你的程序是怎么设置的？
你可以做一个温度梯度，在引物的TM左右5度的样子，多P几管试试。

旁边的是maker，没有咋带，就是我的目的条带，我的退火温度就是低5到6度啊，
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勇往直前
3楼2012-08-07 10:45:58
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况我之前常遇到过，应该是你做的胶的问题或电泳液是不是该换了。还有制胶的TAE重新换一下吧~
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
4楼2012-08-07 10:49:07
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，热心的虫虫 2012-08-07 15:39:47
amisking: 回帖置顶 2012-08-09 19:48:40
如果你PCR环节没有出现问题的话，那么有可能就是跑胶的环节的问题了。
看你旁边的MARKER，条带也比较暗，是否可以适当的增加上样量。或者在配胶的时候EB适当的多加一些。
至于你跑出来的条带异常像月牙，原因有很多啊。。。有可能是，上样量过大或过小；核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份；电泳缓冲液未完全浸没凝胶；电压过高或电泳时间过长致使凝胶过热和DNA变性；凝胶中加入EB造成染色不均；凝胶中有气泡或污染物；点样孔质量差……
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5楼2012-08-07 11:14:05
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wq123good

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流将有 2012-08-07 15:39:59
建议多加点电泳液，确保胶完全浸没，还要确保上样孔中没有气泡，电压可以低一点，慢慢跑
感觉你PCR的过程没有问题，可以把上样量降低一点
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过好每一天
6楼2012-08-07 11:18:28
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-08 14:21:11
PCR没问题，跑胶的问题。一是减少上样量和核酸染料使用量，然后跑电压低一点，时间短一点；二是如果做胶回收可以考虑先电泳后染色。
最好自己重新配新的电泳缓冲液来用。
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为什么
7楼2012-08-07 16:51:09
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世界前沿

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个问题很简单。你电泳时找一个专门回收的电泳槽。我可以帮你回收。可联系我，邮箱：niceone02@163.com
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8楼2012-08-07 17:23:47
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
调低电泳电压，增加点样量，如果要回收的话尽量多点点样品。
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9楼2012-08-07 19:12:59
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这不是PCR的问题，这是电泳的问题。
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10楼2012-08-07 19:39:50
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