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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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丸子龙

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物电泳调低啊异常

PCR后电泳条带异常,请大家帮忙分析一下可能原因,谢谢啦!
W$V}OQOZ({WZ61]N@C$4GG4.jpg(12.87KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DYEHDi-tUAQA4c2?p=130497
反应条件如下:
95℃: 1min
98℃: 10s
梯度56℃、58℃、60℃:15s
72℃:2min30s
30cycles
72℃  7min

[ Last edited by 丸子龙 on 2013-1-9 at 16:49 ]
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上面那么亮是模板加多了吧,对模板定量了吗?一般PCR的模板用量在电泳时看不到的。此外,目的片段多大,用的什么酶?退火时间可以延长到30-45秒。
2楼2013-01-10 07:23:55
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419893334

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有可能模板太多;有可能引物设计不合理;有可能核酸提取有问题,杂质太多,或是已经降解
3楼2013-01-15 15:20:42
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navy132

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你使用什么做的模板?我以前也遇到过这种情况,有可能是PCR反应的酶在反应过程中变性,造成的。你的片段多大,可以试着缩短延伸时间或者调低你的变性温度。98度,个人觉得太高了。
4楼2013-02-15 21:17:21
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