| 查看: 2117 | 回复: 24 | |||
[交流]
连接！转化！出问题了！！！！
|
|||
|
我做的连接转化，后提质粒，利用T载体鉴定试剂盒检测，如图。 目的基因大约是2000bp，连接载体是Promoge载体pGEM-T载体，转化菌株是JM109菌种 连接后，冻融法转化JM109，涂Amp，IPTG, X-gal 平板。 问题1. 出现了，平板全是白斑没有蓝斑！！（Promoge载体自连很严重，但却没有了，而且前段时间是有蓝白斑的，就在这一个月没有蓝斑只有白斑，不但我的实验是这样，整个实验室全是白斑，没有蓝斑） 问题2. 我提质粒显示确是1500的条带（载体大约3000bp），目的基因PCR检测是空白，证明是空载体！！用T载体鉴定试剂盒检测（SP6/T7引物检测）的确是空载体（250bp左右），也同样可以排除1500是细菌基因组DNA的可能性。 求解！！！    212.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有286人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 3Kbp片段转化连接问题
已经有6人回复
- 求助-基因的突变文库相关问题
已经有7人回复
- 克隆出问题了，大家帮忙分析下
已经有15人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 为什么最近做连接转化总是失败
已经有20人回复
- 连接与转化问题
已经有5人回复
- 连接转化问题很烦呀。。
已经有14人回复
- 请教一下连接与转化问题！
已经有11人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
已经有12人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长
已经有16人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
哈尔滨工程大学（青岛）动力工程及工程热物理专业招聘博士1名
+1/486
-
2007年一起玩耍的老虫子们，想死你们啦~~~出来冒个泡吧……
+1/173
-
钠离子电池交流贴
+1/92
-
聊城大学省重点实验室收化学调剂/网上面试无笔试/名额充足/可调专业广泛
+1/86
-
需要调剂化学专业的看过来
+1/40
-
江西理工大学赣南实验室赖朝彬教授团队招收调剂硕士研究生
+1/38
-
国家级人才课题组招研究生 （催化方向）调剂
+1/37
-
大同大学物理学专业硕士研究生招收调剂生
+1/35
-
海南医科大学（海南省医学科学院）李东伟课题组招聘研究助理
+2/20
-
江西师大化学工程学院调剂今晚0点开放！
+1/17
-
350求调剂
+1/13
-
【博士招生】天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/8
-
上海应用技术大学化工学部招生调剂
+1/8
-
徐工-环境工程学院-招收调剂硕士
+1/7
-
齐齐哈尔大学李莉课题组诚招2026级考研调剂生（学硕和专硕）
+1/6
-
徐工-环境工程学院-招收调剂硕士
+1/5
-
吉林工程技术师范学院 材料与化工 （0856） 招收调剂
+1/5
-
哈尔滨医科大学李老师课题组招收生物信息学方向博士、硕士研究生
+1/2
-
北京高校副校长团队招收机械类，环境类学硕和专硕
+1/1
-
2026年青岛大学磁电与新能源材料方向招收硕士生（调剂）
+1/1
2楼2012-12-19 15:05:09
3楼2012-12-19 15:51:49
4楼2012-12-19 16:21:19
5楼2012-12-19 16:25:16
6楼2012-12-19 16:58:04
7楼2012-12-19 16:58:21
8楼2012-12-19 17:09:36
9楼2012-12-19 17:33:30
10楼2012-12-19 17:33:38
11楼2012-12-19 18:04:46
12楼2012-12-19 18:31:44
13楼2012-12-20 09:04:22
14楼2012-12-20 09:08:24
15楼2012-12-20 10:06:31
16楼2012-12-20 10:56:31
17楼2012-12-20 11:02:46
18楼2012-12-20 11:05:17
19楼2012-12-21 09:42:46
21楼2012-12-21 11:49:03
22楼2012-12-26 12:36:23
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
火舞精灵3: 金币+5 2012-12-29 08:53:02
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
火舞精灵3: 金币+5 2012-12-29 08:53:02
|
1：看电泳，你提出来的质粒大小根本不对，3000的质粒+2000的目的条带，根据经验，环形质粒跑出来差不多在3000多点的位置，猜测你提出来的这个是大肠杆菌的基因组碎片. 2：你用了一对T载体上的引物做了一个质粒PCR？是吧.其实PCR这个东西用来作验证是非常不可靠的，可还是很多人喜欢用这个方法，前几天我一师弟做了16管PCR验证，结果非常漂亮，但是提质粒酶切了，全是假阳性.既然你都提质粒了，何不直接单酶切一下，简单准确. 3：蓝白斑，这个已经被我们实验室抛弃很久的方法了，一直用的TAKARA的pMD19-T配合它们家的DH5α，阳性率很可观，随便挑几个菌落基本9成是阳性. PS:好运. |
23楼2012-12-26 15:23:31
25楼2013-01-24 19:21:59
简单回复
钕铁硼20楼
2012-12-21 09:54
回复
su-b0824楼
2012-12-26 17:51
回复
