| 查看: 1948 | 回复: 24 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
连接！转化！出问题了！！！！
|
|||
|
我做的连接转化，后提质粒，利用T载体鉴定试剂盒检测，如图。 目的基因大约是2000bp，连接载体是Promoge载体pGEM-T载体，转化菌株是JM109菌种 连接后，冻融法转化JM109，涂Amp，IPTG, X-gal 平板。 问题1. 出现了，平板全是白斑没有蓝斑！！（Promoge载体自连很严重，但却没有了，而且前段时间是有蓝白斑的，就在这一个月没有蓝斑只有白斑，不但我的实验是这样，整个实验室全是白斑，没有蓝斑） 问题2. 我提质粒显示确是1500的条带（载体大约3000bp），目的基因PCR检测是空白，证明是空载体！！用T载体鉴定试剂盒检测（SP6/T7引物检测）的确是空载体（250bp左右），也同样可以排除1500是细菌基因组DNA的可能性。 求解！！！    212.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有73人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 3Kbp片段转化连接问题
已经有6人回复
- 求助-基因的突变文库相关问题
已经有7人回复
- 克隆出问题了，大家帮忙分析下
已经有15人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 为什么最近做连接转化总是失败
已经有20人回复
- 连接与转化问题
已经有5人回复
- 连接转化问题很烦呀。。
已经有14人回复
- 请教一下连接与转化问题！
已经有11人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
已经有12人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长
已经有16人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
邀您投稿 Polymers 特刊
+1/478
-
限广州，征女友
+2/102
-
南京林业大学特聘教授招聘博后和博士研究生
+1/75
-
【2026/2027 哈工大计算机类博士/硕士招生】
+1/75
-
诚征女友，非诚勿扰
+3/74
-
自驾淄博回四川遂宁过年，寻找小伙伴一起
+1/59
-
大连工业大学 超临界流体技术团队（纺材学院）招收2026级“申请-考核制”博士生
+1/58
-
教育部重点实验室和清华大学某国家重点实验室，联合培养硕生、博生，并长期招博士后
+1/43
-
2026湖南科技大学化学化工学院招新能源电池方向博士生
+1/28
-
中山大学农业与生物技术学院周潇峰课题组诚聘微生物/植物病理学方向科研助理
+1/28
-
【青岛大学】2026年生物与医药博士生招生（含少数民族骨干人才）
+1/28
-
武汉大学博士生/直博生招聘（微纳光驱动与片上光子学）
+5/20
-
青岛大学化学院泰山学者冯佳课题组申请考核制博士招生
+1/13
-
美国密苏里大学堪萨斯城分校（UMKC）生物材料诚聘全奖博士
+1/11
-
电子科技大学崔春华课题组招收物理化学背景博士生1名-申请考核制
+2/10
-
山东大学集成电路学院太赫兹团队博士招生(2026年2月底前)
+1/5
-
广东以色列理工学院博士/硕士招生-通过稀疏观测用数据驱动方法预测湍流
+1/3
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/2
-
华南理工大学宋波教授招收2026年博士生（二氧化碳有机、高分子和光电生物催化还原）
+1/2
-
南开大学齐迹课题组诚聘分子生物学、免疫学、有机分子合成相关方向的博士后和研究生
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
火舞精灵3: 金币+5 2012-12-29 08:53:02
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
火舞精灵3: 金币+5 2012-12-29 08:53:02
|
1：看电泳，你提出来的质粒大小根本不对，3000的质粒+2000的目的条带，根据经验，环形质粒跑出来差不多在3000多点的位置，猜测你提出来的这个是大肠杆菌的基因组碎片. 2：你用了一对T载体上的引物做了一个质粒PCR？是吧.其实PCR这个东西用来作验证是非常不可靠的，可还是很多人喜欢用这个方法，前几天我一师弟做了16管PCR验证，结果非常漂亮，但是提质粒酶切了，全是假阳性.既然你都提质粒了，何不直接单酶切一下，简单准确. 3：蓝白斑，这个已经被我们实验室抛弃很久的方法了，一直用的TAKARA的pMD19-T配合它们家的DH5α，阳性率很可观，随便挑几个菌落基本9成是阳性. PS:好运. |
23楼2012-12-26 15:23:31
2楼2012-12-19 15:05:09
3楼2012-12-19 15:51:49
4楼2012-12-19 16:21:19