| 查看: 2616 | 回复: 24 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
连接！转化！出问题了！！！！
|
|||
|
我做的连接转化，后提质粒，利用T载体鉴定试剂盒检测，如图。 目的基因大约是2000bp，连接载体是Promoge载体pGEM-T载体，转化菌株是JM109菌种 连接后，冻融法转化JM109，涂Amp，IPTG, X-gal 平板。 问题1. 出现了，平板全是白斑没有蓝斑！！（Promoge载体自连很严重，但却没有了，而且前段时间是有蓝白斑的，就在这一个月没有蓝斑只有白斑，不但我的实验是这样，整个实验室全是白斑，没有蓝斑） 问题2. 我提质粒显示确是1500的条带（载体大约3000bp），目的基因PCR检测是空白，证明是空载体！！用T载体鉴定试剂盒检测（SP6/T7引物检测）的确是空载体（250bp左右），也同样可以排除1500是细菌基因组DNA的可能性。 求解！！！    212.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有145人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 3Kbp片段转化连接问题
已经有6人回复
- 求助-基因的突变文库相关问题
已经有7人回复
- 克隆出问题了，大家帮忙分析下
已经有15人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 为什么最近做连接转化总是失败
已经有20人回复
- 连接与转化问题
已经有5人回复
- 连接转化问题很烦呀。。
已经有14人回复
- 请教一下连接与转化问题！
已经有11人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
已经有12人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长
已经有16人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
浙大物院表面物理课题组长期招收普博及直博学生
+2/448
-
华南理工大学 光电材料方向 王竣可教授课题组招聘博士后、博士生及科研助理
+5/430
-
材料理论模拟或理论计算的作用有多大
+1/196
-
急招科研助理/博士后
+2/126
-
【半导体薄膜代工】ALD/CVD/磁控溅射/热蒸发全工艺
+1/93
-
【推免】】中科院国家级人才团队招收27级推免硕士生
+1/73
-
深圳大学 招收2027级推免研究生 (金属材料/ 3D打印/ 氢能等方向)
+3/39
-
山东征女友，坐标济南
+1/37
-
211诚招材化相关专业硕士、博士、博后（长期有效）推免-保研-调剂-申博
+1/31
-
招收 哈工大深圳﹣大湾区大学联合培养博士生1名，2027年入学
+1/30
-
浙江师范大学引进人才被解聘，拒绝支付50万绩效并被索赔211万
+1/25
-
中国科大-合肥国家实验室冷原子量子网络团队招聘启事
+2/16
-
中科院西北研究院招收遥感、地信相关专业联培研究生及科研助理！
+1/11
-
北理工集成电路杰青团队 | 诚招科助理
+1/5
-
北京理工大学-集成电路与电子学院杰青团队-招博士后
+1/4
-
口腔特刊客座招募客编Biofunctional Materials牙科生物功能材料专题，Scopus期刊
+1/4
-
【牙科生物材料特刊征稿】对牙科方向友好（Scopus、DOAJ收录的正规国际期刊）
+1/4
-
北京理工大学-集成电路与电子学院杰青团队-招博士后
+1/3
-
广东省智能院与澳门大学、澳门科技大学、澳理工联合培养博士招生
+1/3
-
哈工大（深圳）招收工程热物理专业2027入学博士生
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
火舞精灵3: 金币+5 2012-12-29 08:53:02
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
火舞精灵3: 金币+5 2012-12-29 08:53:02
|
1：看电泳，你提出来的质粒大小根本不对，3000的质粒+2000的目的条带，根据经验，环形质粒跑出来差不多在3000多点的位置，猜测你提出来的这个是大肠杆菌的基因组碎片. 2：你用了一对T载体上的引物做了一个质粒PCR？是吧.其实PCR这个东西用来作验证是非常不可靠的，可还是很多人喜欢用这个方法，前几天我一师弟做了16管PCR验证，结果非常漂亮，但是提质粒酶切了，全是假阳性.既然你都提质粒了，何不直接单酶切一下，简单准确. 3：蓝白斑，这个已经被我们实验室抛弃很久的方法了，一直用的TAKARA的pMD19-T配合它们家的DH5α，阳性率很可观，随便挑几个菌落基本9成是阳性. PS:好运. |
23楼2012-12-26 15:23:31
2楼2012-12-19 15:05:09
3楼2012-12-19 15:51:49
4楼2012-12-19 16:21:19
