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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

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虫号: 994551

[交流] 连接！转化！出问题了！！！！

我做的连接转化，后提质粒，利用T载体鉴定试剂盒检测，如图。
目的基因大约是2000bp，连接载体是Promoge载体pGEM-T载体，转化菌株是JM109菌种
连接后，冻融法转化JM109，涂Amp，IPTG, X-gal 平板。
问题1. 出现了，平板全是白斑没有蓝斑！！（Promoge载体自连很严重，但却没有了，而且前段时间是有蓝白斑的，就在这一个月没有蓝斑只有白斑，不但我的实验是这样，整个实验室全是白斑，没有蓝斑）

问题2. 我提质粒显示确是1500的条带（载体大约3000bp），目的基因PCR检测是空白，证明是空载体！！用T载体鉴定试剂盒检测（SP6/T7引物检测）的确是空载体（250bp左右），也同样可以排除1500是细菌基因组DNA的可能性。

求解！！！

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1楼 2012-12-19 13:15:28

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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 笑笑天涯 at 2012-12-19 15:05:09
左边的Marker是lamda Hind3?
这个质粒看着很大啊,为什么不拿酶单切下呢?
2kb稍稍有点大,但是还是连得上的,但是连接效率会低一点
连接不上的可能能也有,还要看连接酶效率

左边Marker是LD15000