应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接！转化！出问题了！！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2102  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

[交流] 连接！转化！出问题了！！！！

我做的连接转化，后提质粒，利用T载体鉴定试剂盒检测，如图。
   目的基因大约是2000bp，连接载体是Promoge载体pGEM-T载体，转化菌株是JM109菌种
连接后，冻融法转化JM109，涂Amp，IPTG, X-gal 平板。
    问题1.    出现了，平板全是白斑没有蓝斑！！（Promoge载体自连很严重，但却没有了，而且前段时间是有蓝白斑的，就在这一个月没有蓝斑只有白斑，不但我的实验是这样，整个实验室全是白斑，没有蓝斑）

    问题2.    我提质粒显示确是1500的条带（载体大约3000bp），目的基因PCR检测是空白，证明是空载体！！用T载体鉴定试剂盒检测（SP6/T7引物检测）的确是空载体（250bp左右），也同样可以排除1500是细菌基因组DNA的可能性。
   
    求解！！！

212.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-12-19 13:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个不是你的连接酶出问题就是你的载体出问题了的！换试剂试一下吧！
赞一下 回复此楼
21楼2012-12-21 11:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

笑笑天涯

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-19 17:26:14
左边的Marker是lamda Hind3?
这个质粒看着很大啊,为什么不拿酶单切下呢?
2kb稍稍有点大,但是还是连得上的,但是连接效率会低一点
连接不上的可能能也有,还要看连接酶效率
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-12-19 15:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 笑笑天涯 at 2012-12-19 15:05:09
左边的Marker是lamda Hind3?
这个质粒看着很大啊,为什么不拿酶单切下呢?
2kb稍稍有点大,但是还是连得上的,但是连接效率会低一点
连接不上的可能能也有,还要看连接酶效率

左边Marker是LD15000
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-19 15:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

望海思月

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是你们实验室IPTG, X-gal出问题了，检测不出来，恰好你挑的那几个转化子是空连的
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-19 16:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 青春裁为三截 2026-03-29 3/150 2026-03-29 14:36 by 1018329917
[考研] 332求调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +7 麻辣鱿鱼 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:17 by zllcz
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 291求调剂 +15 hhhhxn.. 2026-03-23 21/1050 2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么！ 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭