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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒酶切
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lvye3707

金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒酶切

我的目的片段是1600左右，酶切位点是Xba I和Sac I ，载体时pMD18-T simple vector，第一张是重组质粒（marker后的4个泳带），第二张是重组质粒酶切后的（marker后的4个泳带），酶切后怎么会出现三条带？是我没酶切彻底嘛？

2012.12.11 提质粒 T正 与 PBI121.jpg



2012.12.12 酶切.jpg
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1楼 2012-12-12 11:33:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
7楼: Originally posted by lvye3707 at 2012-12-12 17:00:56
我用的是 试剂盒提的，100ml  LB+100ul重组质粒+100ul 氨苄，摇到菌液发白，我查了说可能是RNA，在提取过程中，我还特意放置了一段时间，请问能怎么除去呢？对后续试验有什么影响？...

可以直接向质粒里面加1-2 uL的Rnase处理1-2 h。
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lvye3707
Thank-you，so-blue.
8楼2012-12-12 17:31:20
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普通回帖

laihx38j

禁虫 (职业作家)
感谢参与，应助指数 +1
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lvye3707
2楼2012-12-12 15:58:13
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lvye3707

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by laihx38j at 2012-12-12 15:58:13
根据你的电泳图显示，你这是典型的酶切不彻底。建议加大酶量或减少质粒的量

说明书说质粒DNA不大于1ug，我估算，质粒的量还不够。说酶切不彻底是因为没有目的条带么？
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3楼2012-12-12 16:03:40
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laihx38j

禁虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+10 2012-12-12 17:01:20
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-12 19:53:08
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lvye3707
4楼2012-12-12 16:35:12
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
跑到最前面的是啥东西，没有除RNA吧。
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Thank-you，so-blue.
5楼2012-12-12 16:36:51
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lvye3707

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by laihx38j at 2012-12-12 16:35:12
判断酶切不彻底，是因为酶切后还可见没有切开的条带（你把酶切前和酶切后的样品点到同一块胶就可以看见了）

另外没有目的条带，可能是因为只有一个酶发挥了作用，仔细检查一下试剂和酶切体系、条件。

如果没 ...

我酶切后为什么成了3条带呢？
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6楼2012-12-12 16:58:31
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lvye3707

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-12 16:36:51
跑到最前面的是啥东西，没有除RNA吧。

我用的是 试剂盒提的，100ml  LB+100ul重组质粒+100ul 氨苄，摇到菌液发白，我查了说可能是RNA，在提取过程中，我还特意放置了一段时间，请问能怎么除去呢？对后续试验有什么影响？
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7楼2012-12-12 17:00:56
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lvye3707

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-12 17:31:20
可以直接向质粒里面加1-2 uL的Rnase处理1-2 h。...

谢谢了
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9楼2012-12-12 18:14:17
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvye3707: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-12-13 09:32:23
最前面的RNA干扰了你的目的条带，除RNA后彻底酶切
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一直向前！
10楼2012-12-13 08:59:09
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