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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒酶切
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lvye3707

金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒酶切

我的目的片段是1600左右，酶切位点是Xba I和Sac I ，载体时pMD18-T simple vector，第一张是重组质粒（marker后的4个泳带），第二张是重组质粒酶切后的（marker后的4个泳带），酶切后怎么会出现三条带？是我没酶切彻底嘛？

2012.12.11 提质粒 T正 与 PBI121.jpg



2012.12.12 酶切.jpg
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1楼 2012-12-12 11:33:21
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lvye3707

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-12 16:36:51
跑到最前面的是啥东西，没有除RNA吧。

我用的是 试剂盒提的，100ml  LB+100ul重组质粒+100ul 氨苄，摇到菌液发白，我查了说可能是RNA，在提取过程中，我还特意放置了一段时间，请问能怎么除去呢？对后续试验有什么影响？
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7楼2012-12-12 17:00:56
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laihx38j

禁虫 (职业作家)
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lvye3707
2楼2012-12-12 15:58:13
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lvye3707

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by laihx38j at 2012-12-12 15:58:13
根据你的电泳图显示，你这是典型的酶切不彻底。建议加大酶量或减少质粒的量

说明书说质粒DNA不大于1ug，我估算，质粒的量还不够。说酶切不彻底是因为没有目的条带么？
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3楼2012-12-12 16:03:40
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laihx38j

禁虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+10 2012-12-12 17:01:20
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-12 19:53:08
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lvye3707
4楼2012-12-12 16:35:12
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