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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] PCR扩不出目的基因

从细胞中抽提RNA,然后反转录为cDNA,在做定量PCR前先做普通PCR,可是扩了好几次都没扩出来,跟文献用的是同样的引物,PCR反应条件也是参考文献中的,使用了genomic DNA 作为内参,但最终是只有引物二聚体,扩不出目的条带。不知RNA及后续cDNA质量会不会影响PCR,本人是新手,求指教!
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 清风寨 at 2011-09-19 11:09:38:
建议自己设计引物 不要所有都参照文献 退火温度可以设置梯度试一下  延伸时间要充足 等等 有时候自己做PCR时同样条件就有时能出来有时出不来 很是郁闷

(⊙v⊙)嗯  下一步就准备这样做,谢谢您的建议
8楼2011-09-19 12:39:55
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依依米米

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gloryping(金币+2): 2011-09-18 17:26:12
lstt09nk(金币+2): 热心虫友 2011-10-11 14:33:02
做不出来有很多原因的,但鉴于你是新手,我个人觉得是不是有些东西加多了,比如酶一般25u的体系加0.5就很多了,但如果你把枪头完全插进去,壁上沾的就不仅仅0.5了,慢慢来,多试几遍,一定要小心谨慎。生物114 http://www.shengwu114.com/
2楼2011-09-18 17:24:40
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 依依米米 at 2011-09-18 17:24:40:
做不出来有很多原因的,但鉴于你是新手,我个人觉得是不是有些东西加多了,比如酶一般25u的体系加0.5就很多了,但如果你把枪头完全插进去,壁上沾的就不仅仅0.5了,慢慢来,多试几遍,一定要小心谨慎。生物114 [u ...

谢谢解答。酶加多了也会扩不出来吗?
3楼2011-09-18 17:26:57
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hgq115

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

gloryping(金币+2): 2011-09-19 12:36:22
你参照的文献是什么杂志的,还是建议自己设计一次引物,因为很多中文文献上的引物,直接用来做都很难做出来,我曾经就出过这样的问题。
4楼2011-09-19 09:51:51
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