24小时热门版块排行榜    

查看: 1156  |  回复: 6

tmoonday

金虫 (小有名气)

[求助] 急急急!诡异基因PCR扩不出来。。。

小弟最近在扩一基因,第一次试条件的时候扩出来了,但是其后在相同条件下,连续扩了3-4次都没扩出来,不过照胶时貌似有200-300bp片段出现(本人基因在1200-1300bp),请问各位大牛,我应该怎么做哈?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

等一份缘分
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
tmoonday: 金币+1, 有帮助 2012-10-22 10:56:23
既然第一次能P出来,说明你的引物应该没有问题,先确保你的酶没有失效,体系没有问题,先试试吧,做个阳性对照。还有你可以拿你之前扩增出来的片段继续P
2楼2012-10-20 17:47:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
考虑换模板,重做。如果第一次使用高保真扩的,用此产物做模板吧
3楼2012-10-20 19:28:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmoonday

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-20 19:28:02
考虑换模板,重做。如果第一次使用高保真扩的,用此产物做模板吧

我用第一次扩出来的为模板也没扩出来
等一份缘分
4楼2012-10-21 09:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmoonday

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 水寒冰006 at 2012-10-20 17:47:40
既然第一次能P出来,说明你的引物应该没有问题,先确保你的酶没有失效,体系没有问题,先试试吧,做个阳性对照。还有你可以拿你之前扩增出来的片段继续P

我用的50ul体系,40ulddH2O,buffer5ul,其它1ul
等一份缘分
5楼2012-10-21 09:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by tmoonday at 2012-10-21 09:20:46
我用第一次扩出来的为模板也没扩出来...

模板要稀释的,重新逆转录吧,高保真酶的产物容易降解。放一天产物就降解
6楼2012-10-21 10:24:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niena

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-21 10:24:56
模板要稀释的,重新逆转录吧,高保真酶的产物容易降解。放一天产物就降解...

我遇到了同样的情况,目标条带1kb,但扩增出来的200-400bp,我做了梯度,结果也是这样,用的是phusion酶
7楼2012-10-22 14:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tmoonday 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 14/700 2026-08-21 16:51 by applepetty
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见