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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于内参
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7788945

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于内参

想验证一个应该在根部特异性表达的基因在茎和叶中是否有表达，提取了RNA，OD测定260/280 1.8, 260/230 1.28，结果虽然不好但是不愿意再提了，太墨迹，就拿这个反转了，用β-actin做引物试了一下有带，就拿这个模板去P了。跑完一看以为不表达的目的基因跑出来了，原本想用来做阳性对照的β-actin却没跑出来，这是怎么回事呢？主要不懂为什么同样的条件下原本能出的β-actin不出，体系和退火温度是完全一样的，加进去的模板量也是一样的。
另外那位大侠指点一下260/230 值如果过低，像1.28这样的结果会对反转产生一些什么样的影响？
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1楼 2011-03-07 16:11:01
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shihongling

金虫 (小有名气)
7788945(金币+1): 2011-03-07 16:56:28
引用回帖:
Originally posted by 7788945 at 2011-03-07 16:11:01:
想验证一个应该在根部特异性表达的基因在茎和叶中是否有表达，提取了RNA，OD测定260/280 1.8, 260/230 1.28，结果虽然不好但是不愿意再提了，太墨迹，就拿这个反转了，用β-actin做引物试了一下有带，就拿这个模板 ...

同问！顶！
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2楼2011-03-07 16:35:18
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cjl2fl

金虫 (正式写手)
★
7788945(金币+1):谢谢参与
7788945(金币+1): 2011-03-09 09:40:34
不同的组织，引物有差异的吧。。。
是不是对照的问题？
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3楼2011-03-07 17:13:09
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cjl2fl at 2011-03-07 17:13:09:
不同的组织，引物有差异的吧。。。
是不是对照的问题？

不是组织的毛病，问题是前一次能P出来的内参到了第二次P不出来，用的模板、体系、退火温度等条件都一样，第二次没有，不是说这个内参在别的组织里没有
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4楼2011-03-08 15:59:35
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cjl2fl

金虫 (正式写手)
7788945(金币+1): 2011-03-09 09:40:45
我以前遇到类似的问题，换了下BUffer，有效果。不知是否有参考意义？
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5楼2011-03-08 17:09:20
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
7788945(金币+1):谢谢参与
7788945(金币+1): 2011-03-09 09:40:51
内参可能需要另外的条件吧
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6楼2011-03-08 17:25:10
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cjl2fl at 2011-03-08 17:09:20:
我以前遇到类似的问题，换了下BUffer，有效果。不知是否有参考意义？

试试吧，不过应该不是这个原因
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7楼2011-03-08 19:46:42
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-08 17:25:10:
内参可能需要另外的条件吧

神马另外条件呢？
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8楼2011-03-08 19:47:20
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
就是内参的pcr 条件，最有可能是退火温度需要改变一下
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9楼2011-03-09 08:31:41
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-09 08:31:41:
就是内参的pcr 条件，最有可能是退火温度需要改变一下

没仔细看上边的内容，内参的条件是没问题的，是在P出来的基础上又P了一次，没出，是在同一天。可能是引物时间有点长，但应该不是主要原因
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10楼2011-03-09 09:38:18
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