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[交流] 【求助/交流】关于内参

想验证一个应该在根部特异性表达的基因在茎和叶中是否有表达，提取了RNA，OD测定260/280 1.8, 260/230 1.28，结果虽然不好但是不愿意再提了，太墨迹，就拿这个反转了，用β-actin做引物试了一下有带，就拿这个模板去P了。跑完一看以为不表达的目的基因跑出来了，原本想用来做阳性对照的β-actin却没跑出来，这是怎么回事呢？主要不懂为什么同样的条件下原本能出的β-actin不出，体系和退火温度是完全一样的，加进去的模板量也是一样的。
另外那位大侠指点一下260/230 值如果过低，像1.28这样的结果会对反转产生一些什么样的影响？

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1楼 2011-03-07 16:11:01

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银虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by cjl2fl at 2011-03-07 17:13:09:
不同的组织，引物有差异的吧。。。
是不是对照的问题？

不是组织的毛病，问题是前一次能P出来的内参到了第二次P不出来，用的模板、体系、退火温度等条件都一样，第二次没有，不是说这个内参在别的组织里没有

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4楼2011-03-08 15:59:35

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shihongling

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7788945(金币+1): 2011-03-07 16:56:28

引用回帖:

Originally posted by 7788945 at 2011-03-07 16:11:01:
想验证一个应该在根部特异性表达的基因在茎和叶中是否有表达，提取了RNA，OD测定260/280 1.8, 260/230 1.28，结果虽然不好但是不愿意再提了，太墨迹，就拿这个反转了，用β-actin做引物试了一下有带，就拿这个模板 ...

同问！顶！

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2楼2011-03-07 16:35:18

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