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las_vip086

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物测序问题 已有5人参与

引物用的27F/1492R退火温度分别采用55和58度,电泳跑出来条带都很好,亮度也差不多,不知道拿55还是58度的PCR产物好呢,谢谢!
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las_vip086

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-03 14:42:00:
当然任何一个都可以,温度差3度,没有任何影响,放心吧,随便选一个
不过最好连T载体,PCR测序测不全的

汗,我连T载体是什么东东都不知道,自然也无法做了,是T-RFLP吗?这个我们这边没有条件做,要是做RFLP还行,但觉得太麻烦了,呵呵。
10楼2010-08-03 14:44:44
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

las_vip086(金币+1): 2010-08-03 13:28:03
建议割胶回收,连到T载体上,电专涂板,摇菌提质粒,质粒测序
2楼2010-08-03 13:09:17
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las_vip086

木虫 (小有名气)

我是想做克隆文库,样品DNA为环境复杂样品,个人打算直接把PCR产物交给测序公司让他们纯化后铺板挑选100个克隆进行测序。
后续我不想自己再麻烦了,像我这样是送55度产物还是58度PCR产物好呢?谢谢!
3楼2010-08-03 13:31:17
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njauzx

金虫 (小有名气)

弱弱问一下,那两个引物是什么原理?
4楼2010-08-03 13:38:23
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