24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1294  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pET载体酶切 已有4人参与

pET系列的载体很容易切散掉,大家有没有好的建议?
比如双酶切BamHI+XhoI,同时双酶切3个小时可以吗?
转化菌假阳性应该很多
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
恩,应该没有问题,我们切一般都切2个小时的,效果也蛮好的。体系中镁离子的含量挺重要。
7楼2009-12-16 14:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

lzhwin

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
正常情况是不会发生这种问题的:
1、楼主是用DH5α提质粒吗?一般的表达菌株像BL21这样的因为没有突变核酸酶会这样。

2、检查一下酶切用的buffer可能污染了,换一管试试。

3、如果是手提质粒,请在乙醇沉淀之前加一步酚氯仿抽提把蛋白除干净,后面溶解时加rnase去RNA

4、如果是试剂盒提不要忘了用试剂盒里的除蛋白buffer。菌的用量不要超过试剂盒规定的极限。

5、双酶切的时间要看你的体系,如果按照说明书上的比例做应该问题不大。
2楼2009-12-15 19:30:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple-z

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该没问题 我做酶切通常就切2小时
3楼2009-12-15 19:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiyiglad


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个载体很好使,假阳性也不是很高,按照说明书做应该没什么问题,酶切3个小时应该没有问题。个人认为主要还是要看一下是不是buffer的问题。
4楼2009-12-15 19:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +5 楒桉 2026-03-28 5/250 2026-03-28 23:09 by 无际的草原
[考研] 一志愿郑州大学,080500学硕,总分317分求调剂 +5 举个栗子oi 2026-03-24 6/300 2026-03-28 23:03 by lizhi8172
[考研] 315求调剂 +4 akie... 2026-03-28 5/250 2026-03-28 21:05 by zhq0425
[考研] 332求调剂 +5 蕉蕉123 2026-03-28 5/250 2026-03-28 20:50 by 唐沐儿
[考研] 083000学硕274求调剂 +8 Li李鱼 2026-03-26 8/400 2026-03-28 20:33 by 加油向未来啊
[考研] 321求调剂 +6 璞玉~~ 2026-03-25 7/350 2026-03-28 17:48 by 璞玉~~
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
信息提示
请填处理意见