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酶切后没有目的带 已有1人参与
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cd40-t18用BamH1和Bsa1大酶切后，跑胶完全没有目的带，为什么？只有载体片段，没有目的基因片断？ 发自小木虫IOS客户端 |
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是这样的，我用连接了T18载体的目的基因，做转化，测序正确。然后提的质粒，然后进行酶切，先用BamH1再用bsa1，跑胶之后胶回收，做了4次，要么只有目的带，要么只有载体带，要么都有，但是目的带很浅，根本回收不回来，到底什么原因，酶切体系错了还是说酶切量不够，都解释不通呢 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2016-03-06 21:33:40
jackyoung
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2楼2016-03-06 09:10:18
3楼2016-03-06 09:12:37
原海亮
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【答案】应助回帖
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额，都是问号，到底是什么条带都没有，还是只有载体条带呢？首先，你这是挑的克隆子在做验证么，没有目的片段不就是阴性克隆么，重新挑取转化子验证。其次，可以结合pcr的方法来辅助酶切结果，如果是质粒浓度低导致检测不到，则pcr相对更灵敏些，如果pcr验证正确，那基本就是你质粒抽提的问题了，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-06 09:19:54
30