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关于dna变性退火的问题

chengshuya
两条单链dna,想复性成双链结构。想问下,95℃加热后应该选择缓慢冷却还是,冰上快去冷却?这两者有什么区别?
分子生物
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求助蛋白纯化!!蛋白过不下来怎么办呀!

ym9364
目的蛋白分子量53Kd,等电点5.05,ph7.2-7.4最稳定,我用36-86mmol/lNaH2PO4缓冲液洗脱的!ph调的7.3但是都没有条带,是怎么回事埃上样前的...
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CRISOR/cas9 设计sgRNA

冰点文库
本人在做山羊的基因敲除,现在有一段4308bp的碱基序列,需要设计sgRNA,遇到一些问题1,目前大部分sgRNA设计网站,都会限制输入的碱基数量为2000,我是否可以把我的碱基分段设计,然后选取其中特异性最高的sgRNA2,若有能直接输入4000+碱基进行s...
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southern blot 条带微弱,请老师们指点

忒男
制作探针的DNA片段长500bp,探针效率第五个点清晰,第六个点若隐若现。转膜用的恒压法,显色放置的时间有点长谢谢批注2020-08-04155120.png批注2020...
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 生物实验技术资源(测序、PCR、细胞学等18大技术),从入门到精通

yanlang115
2019新版生物医学实验资源大合集,将高分实验方案设计、最新高分文献详细剖析、分子生物学实验技术、细胞生物学实验技术、引物设计、最新pcr相关技术、最规范实验技术实操视频等十二大类实验相关资源进行完美的搜集与整合!大家好好学,发sci指日可待!干货内容以上为概...
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刚做转化不太顺利,求指导

彼岸流年714
转化失败来网上逛一圈找找原因,老看到评论下看到一句话,转个空载体看看能长就是连接的问题,我咋这么看不懂这句话呢[Lasteditedby彼岸流年714on2020-8-5at20:29]
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电泳时电泳槽为什么会有蒸汽

sky0210
电泳时电泳槽为什么会有蒸汽,之前没这种现象,求大神指导……
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这3年,作为生信分析员我都干了啥?接下来3年干啥?

leafy飞
用3年的工作日志,做了一些数据分析,给比我年轻的后浪做个参考,顺便求一波关注'https://www.bilibili.com/video/BV1vi4y137Us'现在有点迷茫,请大虾们给点职业发展建议!
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酶的浓度怎么测

郑凯开开
请问我想测透明质酸酶的浓度,有没有一种快速的,靠谱的,大家广泛承认的方法,来表征酶的浓度
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现在在做橡胶树启动子区域扩不出来求大佬帮我看下

AmaliaWong
两个启动子AT含量高达75.6%和79.6%的启动子然后做了梯度Pcr一个都没出来。。。求各位大佬支支招用的TAKARALaTaq酶
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请教大神挖掘新酶的问题

分子小雪
我用ncbi挖掘出新的木糖苷酶,blast显示是gh43家族的,这个准么,还是具体是什么酶需要自己分析呀,怎么分析它到底是不是木糖苷酶,属于什么家族呀,我今天测新酶对pnpx的酶活,发现无活力。我还需要怎么测活呢?希望大神能帮帮我,谢谢&#128591...
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谷氨酸棒杆菌基因敲除

你,可以的!
有没有做谷氨酸棒杆菌的大神呀?基因敲除敲不掉,求解。。。
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DNA 聚丙烯凝胶电泳图 如何改善

yangxiaomo
做了一周聚丙烯酰胺凝胶电泳,调节了胶浓度、上样量,做出来的图都很丑,请各位大牛指点下该如何改善?1、泳道歪歪扭扭2、条带不直3、一直用100V电压,是否需要提高电压4、上...
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病毒裂解液的配方

大燕子啊
各位大神,求病毒裂解液的配方,不同病毒裂解液体系一样吗?样本类型为呼吸道感染类的拭子样本。谢谢啦
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分享分子生物学和分子遗传学最经典的名著——《基因X》中文版PDF版

yanlang115
20多年来经久不衰的经典名著,看成分子生物学的国际书,免费分享给大家!
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各位小伙伴会分析CDpro软件的结果吗

ly0923
刚学会CDpro,得到的结果不知道啥意思。麻烦各位能给我说说吗?谢谢哈
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用PET46-,表达his融合蛋白,考马斯亮蓝可以看到条带,western检测不出来

琳儿
用PET46-,表达his融合蛋白,考马斯亮蓝可以看到表达条带,western检测HIS标签,却杂不出来,求帮助,已经做了很多次了,就是杂不出来,蛋白也重新纯化过了两次了,考马斯亮蓝染色带是没问题的,western用His抗体就是检测不到条带,加了一个阳性对照...
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电转杯表面氧化

婷宝宝2013
电转杯表面被氧化,发黑,还能继续电转化使用吗?
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GFP亚细胞定位

豆子喔
GFP必须转入的是基因的CDS区吗可以加入UTR区吗起始密码子附近GC含量高无法设置引物可以增加3的倍数的UTR区吗
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酶切连接不成功

HK驱魔者
酶切连接总是没有阳性子,我的基因是菌p得来的,三个基因,我用overlap连起来总长3900bp,载体是petduet-1,酶切位点ecor1和hind3做了一个多月了,试过各种连接比例。我现在在想会不会是我目的基因有什么问题?
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序列比对分析,是同一基因的剪切子

zd5352
请教各位,从转录组数据中得到2个contig序列,氨基酸比对分析一致性94%,这有可能是同一基因的剪切子吗?比对1.jpg
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T0代有表型,后面又消失了,怎么回事?

yuying0421
水稻中敲出一个基因,T0代表型明显,到T2代表型就消失了,怎么回事?是自己修复了吗?
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大肠杆菌BL21(DE3)整合表达

2339773049
有人做过在E.coliBL21(DE3)染色体上的整合表达吗,想请教一下选择了什么位点整合,表达量怎么样,谢谢
分子生物
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pMA5质粒图谱怎么看

2339773049
请教一下大家:1、pMA5质粒的kan基因序列为什么不是以起始密码子开头?2、该抗性基因上下游的启动子和终止子位于哪里?3、想p下来这段抗性基因在大肠中表达,会不会因为p...
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为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子

秦志杰
为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子
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激酶抑制剂测试第二章节---激酶抑制剂分类

开水中游泳
蛋白激酶抑制剂按照是否与ATP结合位点的“铰链区”结合及是否结合激酶的活性构象可分为4种类型(见表1)。其中I型和II型的抑制剂构成了最常见的ATP竞争性抑制剂。在过去的...
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LAMP实验阴性也有扩增

大头er_崽
遇到的问题简直令我头秃,上周本来测试的一个引物好好的,只有加了模板的阳性才能扩增,阴性完美对照。但是这周开始,这个引物也不行啦,阴性也开始出现扩增了,加了UDG也不能很好的解决。我用的是钙黄绿素和HNB来显色的,所以没有开过盖子,大半个月显色问题终于解决,但是...
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TAQ酶厂商是怎么确定酶活性的?

aliaa2019
有没有厂商回答一下啊?荧光定量PCR?定性PCR?esy-023635429.jpg
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单克隆抗体制备方法上的一点困惑

彼岸是水
本人非生物专业,最近学习抗体相关知识,遇到如下问题,还希望专业人士给解惑:抗体制备的方法一:B细胞与骨髓瘤细胞融合、HAT培养基培养、杂交瘤细胞的筛选及克垄小鼠腹水/体外培养制得单克隆抗体。方法二、该方法涉及到细胞株构建议,流程则是细胞株构建(具体涉及到载体构...
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微生物系统发育

jiezai
我的微生物16srRNA基因测序结果在blast上比对后的结果显示微生物和terrisporobacter同源性高,微生物树图画出来确很奇怪?blast比对.png树图....
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