酶切连接不成功
酶切连接总是没有阳性子，我的基因是菌p得来的，三个基因，我用overlap连起来总长3900bp，载体是petduet-1，酶切位点ecor1和hind3做了一个多月了，试过各种连接比例。我现在在想会不会是我目的基因有什么问题？
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多片段连接可用无缝克隆一步与线性化载体构建重组质粒
楼上正解，我们用的诺唯赞的多片段同源重组酶，基本一次成功。（此处不是广告）
或者试试AQUA cloning?
感觉和我们以前实验室遇到问题很像，各种连不上，更多情况都是不长
不考虑给点代言费吗
，