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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切连接不成功
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者HK驱魔者将赠送您 20 个金币

HK驱魔者

铁虫 (正式写手)

[求助] 酶切连接不成功 已有4人参与

酶切连接总是没有阳性子，我的基因是菌p得来的，三个基因，我用overlap连起来总长3900bp，载体是petduet-1，酶切位点ecor1和hind3做了一个多月了，试过各种连接比例。我现在在想会不会是我目的基因有什么问题？

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1楼 2020-08-18 18:12:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qaz199018

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上正解，我们用的诺唯赞的多片段同源重组酶，基本一次成功。（此处不是广告）
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~~~
3楼2020-08-18 21:52:54
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药学小生

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多片段连接可用无缝克隆一步与线性化载体构建重组质粒
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2楼2020-08-18 20:01:36
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ljr080808

捐助贵宾 (小有名气)
或者试试AQUA cloning?

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5楼2020-08-19 08:59:09
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liuj2020

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试试一步克隆，很方便
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10楼2020-08-20 21:11:59
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黑七泷胶庄

新虫 (初入文坛)
确定同源臂设计没问题吗，连不起来很大部分原因是你的同源臂设计不合理

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11楼2020-08-20 22:43:57
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普通回帖

junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2020-08-19 04:18:39
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犹怜草木青

木虫 (职业作家)

热心群众铁柱儿
引用回帖:
3楼: Originally posted by qaz199018 at 2020-08-18 21:52:54
楼上正解，我们用的诺唯赞的多片段同源重组酶，基本一次成功。（此处不是广告）

突然看到了我们公司的名字

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铁柱儿是个温柔的姐姐
6楼2020-08-19 11:59:12
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JICK159

木虫 (正式写手)
感觉和我们以前实验室遇到问题很像，各种连不上，更多情况都是不长
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7楼2020-08-19 13:57:18
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qaz199018

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 犹怜草木青 at 2020-08-19 12:59:12
突然看到了我们公司的名字
...

不考虑给点代言费吗
赞一下 回复此楼
~~~
8楼2020-08-19 16:30:00
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犹怜草木青

木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by qaz199018 at 2020-08-19 16:30:00
不考虑给点代言费吗...

给

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9楼2020-08-19 19:37:01
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