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为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子

作者 秦志杰
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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  •
    wangyuan0929

    楼主给出的信息也太少了吧

  •
    秦志杰

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 11:11:01
    楼主给出的信息也太少了吧

    这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。

  •
    wangyuan0929

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by 秦志杰 at 2020-08-25 22:32:41
    这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。...

    转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

    转化方法是什么呢
    ，

  •
    秦志杰

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-26 08:44:28
    转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

    转化方法是什么呢？...

    偶尔长出的几个转化子提质粒测序是对的。用的是热激转化。应该是这个质粒骨架导致获得的转化子少，将sacB基因连到别的载体骨架转化非常正常。

  •
    sea4on

    您好，可否提供一下质粒.谢谢

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