应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子
61/1返回列表
查看: 2012  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者秦志杰将赠送您 10 个金币

秦志杰

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子

为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-08-24 19:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyuan0929

金虫 (小有名气)
楼主给出的信息也太少了吧
赞一下 回复此楼
2楼2020-08-25 11:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦志杰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 11:11:01
楼主给出的信息也太少了吧

这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。
赞一下 回复此楼
3楼2020-08-25 22:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyuan0929

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 秦志杰 at 2020-08-25 22:32:41
这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。...

转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

转化方法是什么呢？
赞一下 回复此楼
4楼2020-08-26 08:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦志杰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-26 08:44:28
转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

转化方法是什么呢？...

偶尔长出的几个转化子提质粒测序是对的。用的是热激转化。应该是这个质粒骨架导致获得的转化子少，将sacB基因连到别的载体骨架转化非常正常。
赞一下 回复此楼
5楼2020-08-26 09:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sea4on

新虫 (小有名气)
您好，可否提供一下质粒.谢谢

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2020-09-16 14:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 秦志杰 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭