24小时热门版块排行榜    

查看: 1813  |  回复: 5
【悬赏金币】回答本帖问题,作者秦志杰将赠送您 10 个金币

秦志杰

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子

为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyuan0929

金虫 (小有名气)

楼主给出的信息也太少了吧
2楼2020-08-25 11:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦志杰

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 11:11:01
楼主给出的信息也太少了吧

这个质粒用来敲除,需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂,连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个,要么一个也没有。没想明白原因。
3楼2020-08-25 22:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyuan0929

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 秦志杰 at 2020-08-25 22:32:41
这个质粒用来敲除,需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂,连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个,要么一个也没有。没想明白原因。...

转化子做过验证吗?里面有没有质粒和目的基因?

转化方法是什么呢?
4楼2020-08-26 08:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦志杰

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-26 08:44:28
转化子做过验证吗?里面有没有质粒和目的基因?

转化方法是什么呢?...

偶尔长出的几个转化子提质粒测序是对的。用的是热激转化。应该是这个质粒骨架导致获得的转化子少,将sacB基因连到别的载体骨架转化非常正常。
5楼2020-08-26 09:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sea4on

新虫 (小有名气)

您好,可否提供一下质粒.谢谢

发自小木虫IOS客户端
6楼2020-09-16 14:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 秦志杰 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 267求调剂 +5 钓鱼佬as 2026-03-02 5/250 2026-03-03 13:08 by 秋收
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+6 vida_a 2026-03-01 34/1700 2026-03-03 13:04 by 秋收
[考研] 283求调剂 +7 鹿沫笙 2026-03-02 7/350 2026-03-03 10:01 by 乐学xi
[考研] 计算机学硕 分数285求调剂 +3 glwshine 2026-03-02 4/200 2026-03-03 09:41 by 热情沙漠
[考研] 0857调剂 +6 一ll半 2026-02-28 8/400 2026-03-03 09:30 by 热情沙漠
[考研] 276求调剂 +7 路lyh123 2026-02-28 8/400 2026-03-03 09:13 by 杨杨杨紫
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 7/350 2026-03-02 23:02 by 2103240126
[考研] 11408,学硕276求调剂 +3 崔wj 2026-03-02 5/250 2026-03-02 22:14 by 255671
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +8 llx0610 2026-03-02 9/450 2026-03-02 22:09 by 无际的草原
[考研] 一志愿中石油(华东)本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +3 lr1212.. 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:36 by yeahyou
[考研] 一志愿东北大学材料专硕328,求调剂 +3 shs1083 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:27 by houyaoxu
[考研] 0856化工专硕求调剂 +15 董boxing 2026-03-01 15/750 2026-03-02 15:06 by 晃晃不许晃
[考研] 求调剂 +3 熬夜的猫头鹰 2026-03-02 3/150 2026-03-02 11:45 by 刘兵
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
信息提示
请填处理意见