[求助] 为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子

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1楼2020-08-24 19:48:23

sea4on

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您好，可否提供一下质粒.谢谢

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6楼2020-09-16 14:00:38

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wangyuan0929

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楼主给出的信息也太少了吧

2楼2020-08-25 11:11:01

秦志杰

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引用回帖:

2楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 11:11:01
楼主给出的信息也太少了吧

这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。

3楼2020-08-25 22:32:41

wangyuan0929

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 秦志杰 at 2020-08-25 22:32:41
这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。...

转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

转化方法是什么呢？

4楼2020-08-26 08:44:28