[求助] 为什么pk18sacB质粒连接同源片段后转化大肠难以获得转化子

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1楼2020-08-24 19:48:23

秦志杰

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4楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-26 08:44:28
转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

转化方法是什么呢？...

偶尔长出的几个转化子提质粒测序是对的。用的是热激转化。应该是这个质粒骨架导致获得的转化子少，将sacB基因连到别的载体骨架转化非常正常。

5楼2020-08-26 09:25:25

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wangyuan0929

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楼主给出的信息也太少了吧

2楼2020-08-25 11:11:01

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2楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 11:11:01
楼主给出的信息也太少了吧

这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。

3楼2020-08-25 22:32:41

wangyuan0929

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3楼: Originally posted by 秦志杰 at 2020-08-25 22:32:41
这个质粒用来敲除，需要先连接上敲除靶基因的上下游同源臂。将pk18酶切或者环p线性化后用Gibson连接这两个同源臂，连接产物转化大肠杆菌要么得到的转化子只有几个，要么一个也没有。没想明白原因。...

转化子做过验证吗？里面有没有质粒和目的基因？

转化方法是什么呢？

4楼2020-08-26 08:44:28