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求助！！！双酶切连接不上这是为什么 已有7人参与
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| 实验想要让一个7000左右bp的质粒载体变小一点，所以用Kpn1和Not1双酶切，切下一个400bp左右的片段，跑胶，但是看不到400bp的条带，然后In-fusion连上一个20bp左右的片段，然后转化，涂板子，都不长菌，这是说明我的双酶切没成功还是没有连上那个20bp的片段，我要怎样改进实验呢？求指导！都重复实验好几次了，都成功不了啊！ |
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kangaroo0513
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2楼2015-10-15 01:31:57
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9楼2015-10-15 12:29:11
thetc
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【答案】应助回帖
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转化不成功的原因可能有非常多，连接酶的效率，反应的条件，感受态的效率，抗性的选择。建议设立对照组，逐一排查上述问题。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2015-10-15 07:42:19
ocean_of_yu
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我也做infusion，不知道你的marker跑的亮不亮。亮度要看核酸大小，400bp太小了，不一定能看出来。你酶切完后可以直接化转，看看效率如何。证明酶切是否成功。然后再做infusion。你用的哪家公司的？酶切完回收了吗？ 发自小木虫Android客户端 |
8楼2015-10-15 09:46:51
10楼2015-10-15 13:59:06
