应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切回收柱未晾干，对连接影响大么
201/2返回列表12下一页
查看: 1527  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hflf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切回收柱未晾干，对连接影响大么 已有12人参与

双酶切胶回收最后一步，加TE溶解前没有把柱子晾干，可能柱中还有washing buffer，是不是对下一步的连接反应影响很大？我转化涂平板之后发现没有连接成功，其他步骤都没有问题，不知道是不是就是这一步出问题了，有哪位虫友遇到过相似的情况，交流一下啊，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
行到水穷处，坐看云起时！
1楼 2010-05-13 09:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
hflf(金币+1):是有问题，但是感觉应该不会影响这么大吧，一个克隆都没长。 2010-05-13 09:34:33
有问题的，乙醇会影响连接的
赞一下 回复此楼
2楼2010-05-13 09:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
我回帖，楼主给我金币吧
赞一下 回复此楼
3楼2010-05-13 09:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
大家讨论下啊，这连接有时候连不上，怎么回事呢，我们都是目测浓度，没有测DNA的仪器～
赞一下 回复此楼
4楼2010-05-13 09:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
我友情的帮你顶下～
赞一下 回复此楼
5楼2010-05-13 09:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
hflf(金币+1):晾的特别干是个什么概念，在常温晾多久？还是其他方法？ 2010-05-13 10:54:14
肯定会影响，多大就不知道了。我一般晾的特别干。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-05-13 10:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple6299

铁杆木虫 (正式写手)
乙醇是挺容易挥发的，可以试试用浓缩仪把样品浓缩一下下，从而把酒精挥发掉
赞一下 回复此楼
7楼2010-05-13 10:51:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
顶一下
8楼2010-05-13 10:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
hflf(金币+1):空离了，但是没有晾干，直接加了TE，结果就是出不来啊， 2010-05-13 11:22:28
有影响的，还有乙醇会影响连接酶的活性的，你回收最后一步没有空离吗？
赞一下 回复此楼
9楼2010-05-13 11:01:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风而逝

金虫 (小有名气)
★
hflf(金币+1):看来只能重做了， 2010-05-13 11:21:36
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-13 21:46:20
连接酶是分子克隆里面差不多最弱的酶了，washing buffer 没有洗干净，乙醇会使酶失活，连不上的。
碰到这种情况，你只能重新做了，以前的DNA片段再回收产率太低，虽说连接酶效率高，但一般量少于0.1微克你是连不上的。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-05-13 11:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hflf 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +3 15779376950 2026-03-01 3/150 2026-03-01 13:47 by ALZOOZL
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 0856化工专硕求调剂 +6 董boxing 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:45 by houyaoxu
[考研] 0856材料专业298分有科研经历 硕士研究生调剂自荐信 +6 zyf上岸 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:43 by liqiongjy
[考研] 272求调剂 +5 材紫有化 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:51 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料学调剂 +7 提神豆沙包 2026-02-28 9/450 2026-03-01 11:50 by 王伟要上岸啊
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 求调剂 +5 repeatt?t 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:43 by 王伟要上岸啊
[考研] 高分子化学与物理调剂 +5 好好好1233 2026-02-28 9/450 2026-03-01 10:59 by fengyu211
[考研] 291分工科求调剂 +7 science饿饿 2026-03-01 8/400 2026-03-01 10:43 by sunny81
[考研] 0856求调剂285 +6 吕仔龙 2026-02-28 6/300 2026-03-01 10:03 by wang_dand
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-02-28 5/250 2026-03-01 08:49 by ms629
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭