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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切回收柱未晾干，对连接影响大么
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-13 10:01:34:
肯定会影响，多大就不知道了。我一般晾的特别干。。。

晾个十几分中就差不多，我一般去吃饭去了，回来后溶解离心回收，呵呵！
我看他们有的在通风处里抽干，10分钟足以
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
11楼2010-05-13 11:19:37
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hflf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-13 11:19:37:

晾个十几分中就差不多，我一般去吃饭去了，回来后溶解离心回收，呵呵！
我看他们有的在通风处里抽干，10分钟足以

谢谢！
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行到水穷处，坐看云起时！
12楼2010-05-13 11:35:31
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★
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[quote]Originally posted by liyong1981 at 2010-05-13 09:43:33:
大家讨论下啊，这连接有时候连不上，怎么回事呢，我们都是目测浓度，没有测DNA的仪器～ [
跑个电泳 跟MARKER的亮度对比一下就大概知道浓度了
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13楼2010-05-13 12:40:35
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★
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晾干？在离心机中高速开盖离心3min就OK了。
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仕不可不弘毅，任重而道远
14楼2010-05-13 15:18:22
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by cqyniu at 2010-05-13 11:01:05:
有影响的，还有乙醇会影响连接酶的活性的，你回收最后一步没有空离吗？

一般都没有问题的啊，我没有用TE溶，只用了ddH2O，回收片段大的话就把水加热一下。
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15楼2010-05-13 20:55:37
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般额外空离两分钟就足以，我从来不晾干的，从来没有因为这个而不长菌
我感觉你这个不长菌，主要影响不是这个，如果你之前的实验都很好，那么我感觉可能是这次回收的片段本身的原因，浓度、长度等更值得分析一下。
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16楼2010-05-13 23:09:48
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
假如想知道确切的原因，就是重新将得到的DNA纯化，（这次记得晾干），然后再连接，如果还不成功，就说明晾不太干也不一定有问题；若成功，说明的确是没晾干的问题了，以后要多多注意了
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
17楼2010-05-13 23:52:04
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pororo911

铁杆木虫 (小有名气)
★
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建议到37℃培养箱烘个20分钟就ok了
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18楼2010-05-13 23:57:19
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liyong1981

金虫 (正式写手)
同意楼上几位的观点～
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19楼2010-05-14 08:41:32
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liyong1981

金虫 (正式写手)
建议楼主多给大家金币～
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20楼2010-05-14 11:56:14
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