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薇筱123

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!!!双酶切连接不上这是为什么 已有7人参与

实验想要让一个7000左右bp的质粒载体变小一点,所以用Kpn1和Not1双酶切,切下一个400bp左右的片段,跑胶,但是看不到400bp的条带,然后In-fusion连上一个20bp左右的片段,然后转化,涂板子,都不长菌,这是说明我的双酶切没成功还是没有连上那个20bp的片段,我要怎样改进实验呢?求指导!都重复实验好几次了,都成功不了啊!
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jianguochen

新虫 (小有名气)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:12:38
感觉比较奇怪.如果双酶切下400bp的条带的话,那么电泳上不应该看不出来。如果没有酶切成功,用的质粒去做连接转化,那质粒的转化效率应该是比较高的。可以用纯质粒做一次转化,看看能不能转化成功。
6楼2015-10-15 09:16:43
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:11:32
你这描述的就是不想让别人能帮得上忙的样子。。。。
2楼2015-10-15 01:31:57
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thetc

木虫 (小有名气)


myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2015-10-15 18:11:39
查一下你那2个酶的最适条件,把你实验的条件调整调整把。

发自小木虫IOS客户端
加入,希望能学习多一点
3楼2015-10-15 07:35:22
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:11:54
转化不成功的原因可能有非常多,连接酶的效率,反应的条件,感受态的效率,抗性的选择。建议设立对照组,逐一排查上述问题。

发自小木虫IOS客户端
4楼2015-10-15 07:42:19
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