应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助！！！双酶切连接不上这是为什么
51/1返回列表
查看: 1857  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

薇筱123

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！！双酶切连接不上这是为什么 已有7人参与

实验想要让一个7000左右bp的质粒载体变小一点，所以用Kpn1和Not1双酶切，切下一个400bp左右的片段，跑胶，但是看不到400bp的条带，然后In-fusion连上一个20bp左右的片段，然后转化，涂板子，都不长菌，这是说明我的双酶切没成功还是没有连上那个20bp的片段，我要怎样改进实验呢？求指导！都重复实验好几次了，都成功不了啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-14 10:12:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianguochen

新虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:12:38
感觉比较奇怪.如果双酶切下400bp的条带的话，那么电泳上不应该看不出来。如果没有酶切成功，用的质粒去做连接转化，那质粒的转化效率应该是比较高的。可以用纯质粒做一次转化，看看能不能转化成功。
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-15 09:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:11:32
你这描述的就是不想让别人能帮得上忙的样子。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-10-15 01:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thetc

木虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2015-10-15 18:11:39
查一下你那2个酶的最适条件，把你实验的条件调整调整把。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
加入，希望能学习多一点
3楼2015-10-15 07:35:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:11:54
转化不成功的原因可能有非常多，连接酶的效率，反应的条件，感受态的效率，抗性的选择。建议设立对照组，逐一排查上述问题。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-15 07:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭