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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌蛋白SDS-PAGE
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2011108038

银虫 (初入文坛)

[交流] 细菌蛋白SDS-PAGE

我这个是细菌用普通方法提的蛋白，想问下大仙几个问题：条带不清晰是什么原因；条带有的宽，有的窄是什么原因；这图跑的怎么样，有什么问题，请指点

细菌蛋白SDS-PAGE
图片2.jpg
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1楼 2015-06-14 18:10:03
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2011108038

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-06-15 11:58:57
条带不清晰可能是胶做得不是特别好。你跑的这个胶还行吧。条带宽窄不一主要是样品中含有的上样缓冲液的量不一样，造成道次之间的渗透压不同。

非常感谢回复
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12楼2015-06-15 16:51:36
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
条带宽窄不一的主要原因就是要保持上样体积一致，同时有以下几个原因：
原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100μL。
原因二：样品溶解不完全。

至于你的胶图么，E4~E7都是什么啊？E4和E8很模糊，只有全菌跑的还可以，但是从图中无法分辨出表达蛋白是否表达。
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2011108038
9楼2015-06-15 11:42:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
条带不清晰可能是胶做得不是特别好。你跑的这个胶还行吧。条带宽窄不一主要是样品中含有的上样缓冲液的量不一样，造成道次之间的渗透压不同。
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2015-06-15 11:58:57
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2011108038

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-06-15 11:42:14
条带宽窄不一的主要原因就是要保持上样体积一致，同时有以下几个原因：
原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）。如果样 ...

非常感谢回复，这几个样品上样体积是一样的，都是15微升。只是样品之间即细菌的浓度不一样。从大到小逐渐十倍稀释的，我就是想看一下细菌多少浓度能够跑出来条带。还想请问一下，SDS-PAGE一般情况下需要最低蛋白量是多少（2-10微克？？），对应的细菌的浓度大约是多少？？非常感谢。因为我只是提取细菌的全蛋白跑图，没有看特定蛋白的表达。
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11楼2015-06-15 16:51:07
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