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msms

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE 到下方小分子蛋白模糊，分不开

之前发过求助帖，有前辈说可能是缓冲液问题，我又重测的PH，是8.8没错，担心跑胶温度高，用冰浴，但是出来的结果还是这样，连maker都跑的不好，哪位大神能给点建议！
SDS-PAGE 到下方小分子蛋白模糊，分不开
wy 2013-08-28 16hr 30min_副本.jpg
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1楼 2013-08-30 09:46:51
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回帖置顶 ( 共有2个 )

czcpudai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-03 20:59:52
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 20:59:53
小于10KD的蛋白，怎么能使用SDS-PAGE跑呢？？？ 对于小分子肽，使用Tricine-SDS-PAGE胶进行跑，可以分离的比较好。
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13楼2013-08-31 20:26:05
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 这种方法楼主有实践过吗？ 2013-09-03 21:00:17
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 21:00:19
给你个建议，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分离胶中的纯水。
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14楼2013-08-31 20:44:59
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普通回帖

bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-30 11:34:59
楼主的PAGE是分层的吗?
还是整片同一浓度，
上下分层的胶片或许可以解决这个问题喔
例:上层4%，下层12%配置。
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2楼2013-08-30 09:59:05
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wsh01300

铜虫 (小有名气)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-01 02:48:12
跑SDS－PAGE要注意配制溶液所使用的水是否是超纯水。
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3楼2013-08-30 10:04:45
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bugakbug at 2013-08-30 09:59:05
楼主的PAGE是分层的吗?
还是整片同一浓度，
上下分层的胶片或许可以解决这个问题喔
例:上层4%，下层12%配置。

是分的，上面4%的浓缩胶，下面12%的分离胶
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4楼2013-08-30 11:32:35
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsh01300 at 2013-08-30 10:04:45
跑SDS－PAGE要注意配制溶液所使用的水是否是超纯水。

是的，现接的去离子水
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5楼2013-08-30 11:33:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-03 20:59:22
跑的是膜蛋白吗？一般的SDS-PAGE在10kD以下一般都不是很清晰了。
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6楼2013-08-30 11:43:29
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牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-01 02:48:29
我跑的时候用低电压一直跑到底，更改电压有时就会出现模糊的现象的。而且我用固定液在染色前对小分子进行固定然后再然后的，这样会清晰一些。
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7楼2013-08-30 15:36:22
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-01 02:48:38
后面的蛋白分不开很多时候都是正常的现象，你可以考虑调整一下上样的量，或者增加胶的浓度。
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8楼2013-08-30 16:14:30
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-30 11:43:29
跑的是膜蛋白吗？一般的SDS-PAGE在10kD以下一般都不是很清晰了。

是水稻籽粒全蛋白，没有到10kd，到30kd就不清晰了，而且以前跑得下面都很清晰
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9楼2013-08-30 16:54:03
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-08-30 15:36:22
我跑的时候用低电压一直跑到底，更改电压有时就会出现模糊的现象的。而且我用固定液在染色前对小分子进行固定然后再然后的，这样会清晰一些。

电压用的60v，固定液我下次试试
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10楼2013-08-30 16:54:39
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