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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE 到下方小分子蛋白模糊，分不开
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 大海一孤舟 at 2013-08-30 16:14:30
后面的蛋白分不开很多时候都是正常的现象，你可以考虑调整一下上样的量，或者增加胶的浓度。

问题是以前都能分开，一样的上样量一样的浓度
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11楼2013-08-30 16:55:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by msms at 2013-08-30 16:54:03
是水稻籽粒全蛋白，没有到10kd，到30kd就不清晰了，而且以前跑得下面都很清晰...

电泳缓冲液是新配置的吗？样品处理用了足够的DTT或者巯基乙醇了吗？
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12楼2013-08-31 02:46:54
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-03 20:59:52
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 20:59:53
小于10KD的蛋白，怎么能使用SDS-PAGE跑呢？？？ 对于小分子肽，使用Tricine-SDS-PAGE胶进行跑，可以分离的比较好。
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13楼2013-08-31 20:26:05
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 这种方法楼主有实践过吗？ 2013-09-03 21:00:17
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 21:00:19
给你个建议，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分离胶中的纯水。
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14楼2013-08-31 20:44:59
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的目的蛋白多大？10KD以下建议用tricine胶跑。
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
15楼2013-08-31 23:25:21
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-08-31 20:44:59
给你个建议，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分离胶中的纯水。

嗯，我试试看，谢谢。
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16楼2013-09-02 08:48:56
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冬虫夏草1 at 2013-08-31 23:25:21
你的目的蛋白多大？10KD以下建议用tricine胶跑。

目地蛋白 15-57kd
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17楼2013-09-02 08:49:17
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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-09-03 21:00:41
我的实验室做法：浓缩胶5%,分离胶12%；注意Tris-clPH不一样的（6.8    ，8.8），上样20ul，100V过浓缩胶，130V跑结束就行；有的时候染液也有可能出问题的，建议换一下试试。另外测缓冲液PH要在溶液温度25摄氏度，不然差别很大的。
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18楼2013-09-02 10:58:47
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 514278815 at 2013-09-02 10:58:47
我的实验室做法：浓缩胶5%,分离胶12%；注意Tris-clPH不一样的（6.8    ，8.8），上样20ul，100V过浓缩胶，130V跑结束就行；有的时候染液也有可能出问题的，建议换一下试试。另外测缓冲液PH要在溶液温度25摄氏度，不 ...

嗯，我的配方是跟你一样的，我再试试，谢谢啦！
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19楼2013-09-03 20:23:21
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