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11楼2013-08-30 16:55:07

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

9楼: Originally posted by msms at 2013-08-30 16:54:03
是水稻籽粒全蛋白，没有到10kd，到30kd就不清晰了，而且以前跑得下面都很清晰...

电泳缓冲液是新配置的吗？样品处理用了足够的DTT或者巯基乙醇了吗？

12楼2013-08-31 02:46:54

czcpudai

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-03 20:59:52
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 20:59:53

小于10KD的蛋白，怎么能使用SDS-PAGE跑呢？？？对于小分子肽，使用Tricine-SDS-PAGE胶进行跑，可以分离的比较好。

13楼2013-08-31 20:26:05

mamadexiao

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gyesang: 金币+2, 这种方法楼主有实践过吗？ 2013-09-03 21:00:17
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 21:00:19

给你个建议，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分离胶中的纯水。

14楼2013-08-31 20:44:59

冬虫夏草1

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感谢参与，应助指数 +1

你的目的蛋白多大？10KD以下建议用tricine胶跑。

倚楼听风雨，淡看江湖路！

15楼2013-08-31 23:25:21

msms

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引用回帖:

14楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-08-31 20:44:59
给你个建议，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分离胶中的纯水。

嗯，我试试看，谢谢。

16楼2013-09-02 08:48:56

msms

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15楼: Originally posted by 冬虫夏草1 at 2013-08-31 23:25:21
你的目的蛋白多大？10KD以下建议用tricine胶跑。

目地蛋白 15-57kd

17楼2013-09-02 08:49:17

514278815

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-09-03 21:00:41

我的实验室做法：浓缩胶5%,分离胶12%；注意Tris-clPH不一样的（6.8 ，8.8），上样20ul，100V过浓缩胶，130V跑结束就行；有的时候染液也有可能出问题的，建议换一下试试。另外测缓冲液PH要在溶液温度25摄氏度，不然差别很大的。

18楼2013-09-02 10:58:47

msms

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引用回帖:

18楼: Originally posted by 514278815 at 2013-09-02 10:58:47
我的实验室做法：浓缩胶5%,分离胶12%；注意Tris-clPH不一样的（6.8 ，8.8），上样20ul，100V过浓缩胶，130V跑结束就行；有的时候染液也有可能出问题的，建议换一下试试。另外测缓冲液PH要在溶液温度25摄氏度，不 ...

嗯，我的配方是跟你一样的，我再试试，谢谢啦！

19楼2013-09-03 20:23:21