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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？
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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？

如题，我现在有两个蛋白条带，各大约40kD,39kD,用12%胶分离快挤一块了，想切胶扣带进行下步质谱分析，但不放心，想分的更开点，今天刚试了15%胶更不行。电泳条件均为先80v（5%积层胶），后150V。
请问，要用多少浓度的胶分呢，10%or更低的？太低会不会煮胶染色时破裂？或者，电泳条件有什么需要改变的？
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2013-3-18 at 22:37 ]
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学会感恩，强大自我
1楼 2013-03-18 22:30:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-03-19 08:34:17
youngsun50: 金币+5 2013-03-19 15:25:25
如果12%的胶分不开的话，不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试，电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素，这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。
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2楼2013-03-19 07:03:02
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 07:03:02
如果12%的胶分不开的话，不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试，电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素，这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。

谢谢，请问8%的胶会不会太脆弱？因为我的染色是快速的，需要煮沸
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学会感恩，强大自我
3楼2013-03-19 08:01:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-03-19 08:01:31
谢谢，请问8%的胶会不会太脆弱？因为我的染色是快速的，需要煮沸...

我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软，我觉得应该没事。祝好运。
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4楼2013-03-19 13:11:01
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 13:11:01
我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软，我觉得应该没事。祝好运。...

谢谢了，我用10％的刚好分开

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学会感恩，强大自我
5楼2013-03-19 15:24:30
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%           蛋白质分离范围/kd
5                                36—200
7.5                              24—200
10                               14—200
12.5                              14—100
15                                14—60
浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。

参考：吕宪禹 主编，蛋白质纯化实验方案与应用，化学工业出版社，2010，第168页。
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6楼2013-07-14 12:20:35
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-14 12:20:35
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%           蛋白质分离范围/kd
5                                36—200
7.5                              24—200
10                ...

谢谢，已解决，用的10％分离的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学会感恩，强大自我
7楼2013-07-16 21:13:15
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jhw622

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-07-16 21:13:15
谢谢，已解决，用的10％分离的
...

楼主当时用的是什么电压，多长时间跑的？我也正好遇到35KD 左右需要分开的蛋白。谢谢！
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8楼2014-04-06 20:24:02
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