应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？
81/1返回列表
查看: 2587  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？

如题，我现在有两个蛋白条带，各大约40kD,39kD,用12%胶分离快挤一块了，想切胶扣带进行下步质谱分析，但不放心，想分的更开点，今天刚试了15%胶更不行。电泳条件均为先80v（5%积层胶），后150V。
请问，要用多少浓度的胶分呢，10%or更低的？太低会不会煮胶染色时破裂？或者，电泳条件有什么需要改变的？
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2013-3-18 at 22:37 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
学会感恩，强大自我
1楼 2013-03-18 22:30:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-03-19 08:34:17
youngsun50: 金币+5 2013-03-19 15:25:25
如果12%的胶分不开的话，不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试，电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素，这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-19 07:03:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 07:03:02
如果12%的胶分不开的话，不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试，电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素，这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。

谢谢，请问8%的胶会不会太脆弱？因为我的染色是快速的，需要煮沸
赞一下 回复此楼
学会感恩，强大自我
3楼2013-03-19 08:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-03-19 08:01:31
谢谢，请问8%的胶会不会太脆弱？因为我的染色是快速的，需要煮沸...

我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软，我觉得应该没事。祝好运。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-19 13:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 13:11:01
我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软，我觉得应该没事。祝好运。...

谢谢了，我用10％的刚好分开

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
学会感恩，强大自我
5楼2013-03-19 15:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%           蛋白质分离范围/kd
5                                36—200
7.5                              24—200
10                               14—200
12.5                              14—100
15                                14—60
浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。

参考：吕宪禹 主编，蛋白质纯化实验方案与应用，化学工业出版社，2010，第168页。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-07-14 12:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-14 12:20:35
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%           蛋白质分离范围/kd
5                                36—200
7.5                              24—200
10                ...

谢谢，已解决，用的10％分离的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
学会感恩，强大自我
7楼2013-07-16 21:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhw622

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-07-16 21:13:15
谢谢，已解决，用的10％分离的
...

楼主当时用的是什么电压，多长时间跑的？我也正好遇到35KD 左右需要分开的蛋白。谢谢！
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-04-06 20:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 youngsun50 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭