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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 40KD,39KD蛋白,SDS-PAGE如何分离,胶浓度?

如题,我现在有两个蛋白条带,各大约40kD,39kD,用12%胶分离快挤一块了,想切胶扣带进行下步质谱分析,但不放心,想分的更开点,今天刚试了15%胶更不行。电泳条件均为先80v(5%积层胶),后150V。
请问,要用多少浓度的胶分呢,10%or更低的?太低会不会煮胶染色时破裂?或者,电泳条件有什么需要改变的?
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2013-3-18 at 22:37 ]
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学会感恩,强大自我
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-03-19 08:34:17
youngsun50: 金币+5 2013-03-19 15:25:25
如果12%的胶分不开的话,不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试,电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素,这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。
2楼2013-03-19 07:03:02
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youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 07:03:02
如果12%的胶分不开的话,不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试,电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素,这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。

谢谢,请问8%的胶会不会太脆弱?因为我的染色是快速的,需要煮沸
学会感恩,强大自我
3楼2013-03-19 08:01:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-03-19 08:01:31
谢谢,请问8%的胶会不会太脆弱?因为我的染色是快速的,需要煮沸...

我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软,我觉得应该没事。祝好运。
4楼2013-03-19 13:11:01
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youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 13:11:01
我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软,我觉得应该没事。祝好运。...

谢谢了,我用10%的刚好分开

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学会感恩,强大自我
5楼2013-03-19 15:24:30
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系:
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%           蛋白质分离范围/kd
5                                36—200
7.5                              24—200
10                               14—200
12.5                              14—100
15                                14—60
浓缩胶浓度低;分离胶浓度高于浓缩胶,一般不小于5%。

参考:吕宪禹 主编,蛋白质纯化实验方案与应用,化学工业出版社,2010,第168页。
6楼2013-07-14 12:20:35
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youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-14 12:20:35
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系:
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%           蛋白质分离范围/kd
5                                36—200
7.5                              24—200
10                ...

谢谢,已解决,用的10%分离的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学会感恩,强大自我
7楼2013-07-16 21:13:15
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jhw622

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-07-16 21:13:15
谢谢,已解决,用的10%分离的
...

楼主当时用的是什么电压,多长时间跑的?我也正好遇到35KD 左右需要分开的蛋白。谢谢!
8楼2014-04-06 20:24:02
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