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youngsun50

木虫 (正式写手)

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[求助] 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？

如题，我现在有两个蛋白条带，各大约40kD,39kD,用12%胶分离快挤一块了，想切胶扣带进行下步质谱分析，但不放心，想分的更开点，今天刚试了15%胶更不行。电泳条件均为先80v（5%积层胶），后150V。
请问，要用多少浓度的胶分呢，10%or更低的？太低会不会煮胶染色时破裂？或者，电泳条件有什么需要改变的？
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2013-3-18 at 22:37 ]

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学会感恩，强大自我

1楼 2013-03-18 22:30:40

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凌波丽

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专业: 生物大分子结构与功能
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聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%          蛋白质分离范围/kd
5                               36—200
7.5                            24—200
10                            14—200
12.5                            14—100
15                               14—60
浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。

参考：吕宪禹主编，蛋白质纯化实验方案与应用，化学工业出版社，2010，第168页。

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6楼2013-07-14 12:20:35

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