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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？
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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 40KD,39KD蛋白，SDS-PAGE如何分离，胶浓度？

如题，我现在有两个蛋白条带，各大约40kD,39kD,用12%胶分离快挤一块了，想切胶扣带进行下步质谱分析，但不放心，想分的更开点，今天刚试了15%胶更不行。电泳条件均为先80v（5%积层胶），后150V。
请问，要用多少浓度的胶分呢，10%or更低的？太低会不会煮胶染色时破裂？或者，电泳条件有什么需要改变的？
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2013-3-18 at 22:37 ]
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学会感恩，强大自我
1楼 2013-03-18 22:30:40
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 07:03:02
如果12%的胶分不开的话，不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试，电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素，这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。

谢谢，请问8%的胶会不会太脆弱？因为我的染色是快速的，需要煮沸
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学会感恩，强大自我
3楼2013-03-19 08:01:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-03-19 08:34:17
youngsun50: 金币+5 2013-03-19 15:25:25
如果12%的胶分不开的话，不改变胶的性质而只变变浓度想分开有一定难度。10%或者8%的胶你可以试试，电泳时间尽量长一些。还可以试试加尿素，这个只对有些蛋白有效果。实在不行的话做双向电泳分。
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2楼2013-03-19 07:03:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by youngsun50 at 2013-03-19 08:01:31
谢谢，请问8%的胶会不会太脆弱？因为我的染色是快速的，需要煮沸...

我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软，我觉得应该没事。祝好运。
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4楼2013-03-19 13:11:01
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-19 13:11:01
我没有试过煮沸的方法。胶浓度小的话会比较软，我觉得应该没事。祝好运。...

谢谢了，我用10％的刚好分开

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学会感恩，强大自我
5楼2013-03-19 15:24:30
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