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2011108038

银虫 (初入文坛)


[交流] 细菌蛋白SDS-PAGE

我这个是细菌用普通方法提的蛋白,想问下大仙几个问题:条带不清晰是什么原因;条带有的宽,有的窄是什么原因;这图跑的怎么样,有什么问题,请指点

细菌蛋白SDS-PAGE
图片2.jpg
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
条带宽窄不一的主要原因就是要保持上样体积一致,同时有以下几个原因:
原因一:上样量过多,应该减少上样量。对策:加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL(即2-10μg蛋白质)。如果样品很稀上样量可以达到100μL。
原因二:样品溶解不完全。

至于你的胶图么,E4~E7都是什么啊?E4和E8很模糊,只有全菌跑的还可以,但是从图中无法分辨出表达蛋白是否表达。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2015-06-15 11:42:14
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查看全部 12 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
条带不清晰可能是胶做得不是特别好。你跑的这个胶还行吧。条带宽窄不一主要是样品中含有的上样缓冲液的量不一样,造成道次之间的渗透压不同。
10楼2015-06-15 11:58:57
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2011108038

银虫 (初入文坛)


送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-06-15 11:42:14
条带宽窄不一的主要原因就是要保持上样体积一致,同时有以下几个原因:
原因一:上样量过多,应该减少上样量。对策:加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL(即2-10μg蛋白质)。如果样 ...

非常感谢回复,这几个样品上样体积是一样的,都是15微升。只是样品之间即细菌的浓度不一样。从大到小逐渐十倍稀释的,我就是想看一下细菌多少浓度能够跑出来条带。还想请问一下,SDS-PAGE一般情况下需要最低蛋白量是多少(2-10微克??),对应的细菌的浓度大约是多少??非常感谢。因为我只是提取细菌的全蛋白跑图,没有看特定蛋白的表达。
11楼2015-06-15 16:51:07
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2011108038

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-06-15 11:58:57
条带不清晰可能是胶做得不是特别好。你跑的这个胶还行吧。条带宽窄不一主要是样品中含有的上样缓冲液的量不一样,造成道次之间的渗透压不同。

非常感谢回复
12楼2015-06-15 16:51:36
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