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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 等电聚焦蛋白样品条带分不开？
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chibang1220

木虫 (著名写手)

[求助] 等电聚焦蛋白样品条带分不开？ 已有3人参与

多次跑等电聚焦时Maker条带分的很开，但是样品和标准品蛋白却是模糊的一块是怎么回事啊？

等电聚焦蛋白样品条带分不开？
20150604-2 等电点 考染 ZJJ.JPG
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人的差别在于业余时间
1楼 2015-06-11 11:31:44
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家有恶狗

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品从新处理下试试呢    跑不开？   你跑了多久啊  时间短吧
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2楼2015-06-11 11:36:35
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chibang1220

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 家有恶狗 at 2015-06-11 11:36:35
样品从新处理下试试呢    跑不开？   你跑了多久啊  时间短吧

不短啊，100V，30min,200V30min,400V2h
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人的差别在于业余时间
3楼2015-06-18 16:46:04
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wsq5574792

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-18 22:39:40
你先说说你的蛋白胶的丙烯酰胺浓度，marker的型号。

感觉像是蛋白弥散或者降解了。还是应该重新处理样品，确保你的样品不会降解。从marker上看胶基本没有问题，问题只会出在样品上。
赞一下 回复此楼
我是一个贼，一个偷心的贼。
4楼2015-06-18 18:07:38
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-18 22:39:57
你确定你这是等点聚焦？等点聚焦需要有pH梯度的，而且电泳时间很长的，你这个应该是聚丙烯酰胺凝胶电泳吧，或者是双向电泳第二向，如果是凝胶电泳，正常情况不应该是恒流的吗？所以请楼主详细说明问题再行解答，谢谢
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没有做不到，只有想不到！
5楼2015-06-18 18:32:48
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chibang1220

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wsq5574792 at 2015-06-18 18:07:38
你先说说你的蛋白胶的丙烯酰胺浓度，marker的型号。

感觉像是蛋白弥散或者降解了。还是应该重新处理样品，确保你的样品不会降解。从marker上看胶基本没有问题，问题只会出在样品上。

Maker没问题，因为跑别的样品时Maker跑得很好，样品要怎么处理啊？上样缓冲液怎么配的啊您知道吗？
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人的差别在于业余时间
6楼2015-06-19 08:28:36
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wsq5574792

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chibang1220 at 2015-06-19 08:28:36
Maker没问题，因为跑别的样品时Maker跑得很好，样品要怎么处理啊？上样缓冲液怎么配的啊您知道吗？...

我这边是样品加10%的上样缓冲液，上样缓冲液配置宝生物书上有。
10×sample buffer 50ml
原料 体积 终浓度
100%甘油 25ml 50%
10%SDS 10ml 4%
巯基乙醇 5ml 28.8mM
1.5ml Tris-HCl pH 6.8 4ml 120mM
DTT 0.77g 0.1M
EDTA 0.5M 0.1ml 1mM
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我是一个贼，一个偷心的贼。
7楼2015-06-19 10:26:43
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