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helig

新虫 (初入文坛)

[交流] IEF等电聚焦问题 已有2人参与

最近做一个75KB的蛋白的IEF,用的BIO-RAD的固体水平mini电泳槽,用的GE的低PI范围的Marker,但是跑出来后靠近阳极的两条低PI的marker条带老跑不出来,而且样品跑出来不是一条很窄的带,而是一片比较 模糊的带,因为以前同样的蛋白跑出来等电点是4.6左右,现在却到了5.8左右了,条件基本上没变,就是用了BIO-RAD的支持膜,以前用Amersham的,请问一般什么条件会影响等电聚焦的条带清晰度,而靠近阳极的带老跑不到阳极附近不知道怎么回事?在线等高人指点,谢谢!!(丙烯酰胺交联度:5%T,3%C。聚焦电压:450v 一小时)

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-21 at 13:57 ]
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helig

新虫 (初入文坛)

上图是今天做的,靠近阴极的PI高的marker跑的还可以,但是靠近阳极的pI低的marker好像都挤到一块了,没有跑开,不知道跟那个条件有关

[ Last edited by helig on 2009-2-25 at 21:39 ]
2楼2009-02-25 15:58:26
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lujun01

银虫 (小有名气)

告诉我你的样品处理过程
有没有尿素?
3楼2009-05-19 15:46:37
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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

IEF


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我是做薄层等电聚焦的新手,想请教一下,IEF操作方法是怎么样的?为什么我的电流总是很小,而且跑不出带来??
希望能指点指点,不然我的实验完全不能进行!!

4楼2011-03-15 14:22:33
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youxuexuan

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by helig at 2009-02-25 15:58:26
上图是今天做的,靠近阴极的PI高的marker跑的还可以,但是靠近阳极的pI低的marker好像都挤到一块了,没有跑开,不知道跟那个条件有关

同问,我是用GE的水平电泳仪,胶是按照15版药典制的,条件是2000V,50mA,1.5h。然后跑完染色发现,marker的条带数目缺少,靠近正极的条带都没有了,自己的样品好的都是酸的,都没有条带染出,只会在上样位置有条带。还有一个是碱性的蛋白,就有条带。
求解释下呗,,
5楼2016-06-03 12:21:01
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