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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » IEF等电聚焦问题
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helig

新虫 (初入文坛)

[交流] IEF等电聚焦问题 已有2人参与

最近做一个75KB的蛋白的IEF，用的BIO-RAD的固体水平mini电泳槽，用的GE的低PI范围的Marker，但是跑出来后靠近阳极的两条低PI的marker条带老跑不出来，而且样品跑出来不是一条很窄的带，而是一片比较 模糊的带，因为以前同样的蛋白跑出来等电点是4.6左右，现在却到了5.8左右了，条件基本上没变，就是用了BIO-RAD的支持膜，以前用Amersham的，请问一般什么条件会影响等电聚焦的条带清晰度，而靠近阳极的带老跑不到阳极附近不知道怎么回事？在线等高人指点，谢谢！！（丙烯酰胺交联度：5%T，3%C。聚焦电压：450v 一小时）

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-21 at 13:57 ]
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1楼 2009-02-24 21:57:38
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helig

新虫 (初入文坛)
上图是今天做的，靠近阴极的PI高的marker跑的还可以，但是靠近阳极的pI低的marker好像都挤到一块了，没有跑开，不知道跟那个条件有关

[ Last edited by helig on 2009-2-25 at 21:39 ]
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2楼2009-02-25 15:58:26
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lujun01

银虫 (小有名气)
告诉我你的样品处理过程
有没有尿素?
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3楼2009-05-19 15:46:37
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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

IEF

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我是做薄层等电聚焦的新手，想请教一下，IEF操作方法是怎么样的？为什么我的电流总是很小，而且跑不出带来？？
希望能指点指点，不然我的实验完全不能进行！！
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4楼2011-03-15 14:22:33
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youxuexuan

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by helig at 2009-02-25 15:58:26
上图是今天做的，靠近阴极的PI高的marker跑的还可以，但是靠近阳极的pI低的marker好像都挤到一块了，没有跑开，不知道跟那个条件有关

同问，我是用GE的水平电泳仪，胶是按照15版药典制的，条件是2000V，50mA，1.5h。然后跑完染色发现，marker的条带数目缺少，靠近正极的条带都没有了，自己的样品好的都是酸的，都没有条带染出，只会在上样位置有条带。还有一个是碱性的蛋白，就有条带。
求解释下呗，，
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5楼2016-06-03 12:21:01
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