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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是怎么回事？

本人是个新手，目前做蛋白电泳，有一些问题想请教一下大家。
    1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的？
    2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电泳的话怎么存放，放在4℃？下次电泳之前还用不用煮沸？
    3、稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃还是4℃？
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1楼 2013-11-05 11:30:56
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-06 00:53:19
574759350: 金币+2, ★有帮助 2013-11-06 08:18:13


1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的？
这个可能是因为你的蛋白分子量小，用15%的分离胶试一下，或者Tricine-SDS-PAGE试一下也可以。

2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电泳的话怎么存放，放在4℃？下次电泳之前还用不用煮沸？
最好放-20℃，下次电泳前融化混合均匀就可以上样了。

3、稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃还是4℃？
稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃，最好分装成小管保存，防止反复冻融。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-11-05 22:03:51
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-05 22:03:51


1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的？
这个可能是因为你的蛋白分子量小，用15%的分离胶试一下，或者Tricine-SDS-PAGE试一下也可以。

2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电 ...

溴酚蓝的位置大约在二十几KD的位置，很多蛋白条带都在它的前边，同样的样品以前跑的时候不是这种情况，这些蛋白条带都是在溴酚蓝后边的，不知道为什么？
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3楼2013-11-06 08:20:58
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 08:20:58
溴酚蓝的位置大约在二十几KD的位置，很多蛋白条带都在它的前边，同样的样品以前跑的时候不是这种情况，这些蛋白条带都是在溴酚蓝后边的，不知道为什么？...

你的分离胶浓度是多少，可能是你前后用的分离胶浓度不一样吧？？？
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
4楼2013-11-06 10:18:19
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-06 10:18:19
你的分离胶浓度是多少，可能是你前后用的分离胶浓度不一样吧？？？...

都是用10%的分离胶，5%的浓缩胶。
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5楼2013-11-06 12:06:15
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 12:06:15
都是用10%的分离胶，5%的浓缩胶。...

用15%的分离胶试一下
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
6楼2013-11-06 17:11:57
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-06 17:11:57
用15%的分离胶试一下...

恩，再试一下
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7楼2013-11-06 17:14:42
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cyk880606

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 17:14:42
恩，再试一下...

我的也出现过你这样的情况，后来你怎么解决了?我前几天跑的胶，溴酚蓝在最前边，但是这几天跑的胶的小分子量条带不知怎的有在溴酚蓝前边的。所有条件都一样啊。我很纳闷啊。
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8楼2014-05-16 18:45:04
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cyk880606 at 2014-05-16 18:45:04
我的也出现过你这样的情况，后来你怎么解决了?我前几天跑的胶，溴酚蓝在最前边，但是这几天跑的胶的小分子量条带不知怎的有在溴酚蓝前边的。所有条件都一样啊。我很纳闷啊。...

最近我一直没做呢,我增加了一下分离胶的浓度还是这样,我觉得可能是配胶的缓冲液PH改变了，你可以重新调一下试试
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9楼2014-05-20 10:54:34
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