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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是怎么回事?

本人是个新手,目前做蛋白电泳,有一些问题想请教一下大家。
    1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的?
    2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电泳的话怎么存放,放在4℃?下次电泳之前还用不用煮沸?
    3、稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃还是4℃?
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 00:53:19
574759350: 金币+2, 有帮助 2013-11-06 08:18:13


1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的?
这个可能是因为你的蛋白分子量小,用15%的分离胶试一下,或者Tricine-SDS-PAGE试一下也可以。

2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电泳的话怎么存放,放在4℃?下次电泳之前还用不用煮沸?
最好放-20℃,下次电泳前融化混合均匀就可以上样了。

3、稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃还是4℃?
稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃,最好分装成小管保存,防止反复冻融。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
2楼2013-11-05 22:03:51
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574759350

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-05 22:03:51


1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的?
这个可能是因为你的蛋白分子量小,用15%的分离胶试一下,或者Tricine-SDS-PAGE试一下也可以。

2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电 ...

溴酚蓝的位置大约在二十几KD的位置,很多蛋白条带都在它的前边,同样的样品以前跑的时候不是这种情况,这些蛋白条带都是在溴酚蓝后边的,不知道为什么?
3楼2013-11-06 08:20:58
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 08:20:58
溴酚蓝的位置大约在二十几KD的位置,很多蛋白条带都在它的前边,同样的样品以前跑的时候不是这种情况,这些蛋白条带都是在溴酚蓝后边的,不知道为什么?...

你的分离胶浓度是多少,可能是你前后用的分离胶浓度不一样吧???
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
4楼2013-11-06 10:18:19
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574759350

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-06 10:18:19
你的分离胶浓度是多少,可能是你前后用的分离胶浓度不一样吧???...

都是用10%的分离胶,5%的浓缩胶。
5楼2013-11-06 12:06:15
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 12:06:15
都是用10%的分离胶,5%的浓缩胶。...

用15%的分离胶试一下
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
6楼2013-11-06 17:11:57
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574759350

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-06 17:11:57
用15%的分离胶试一下...

恩,再试一下
7楼2013-11-06 17:14:42
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cyk880606

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 17:14:42
恩,再试一下...

我的也出现过你这样的情况,后来你怎么解决了?我前几天跑的胶,溴酚蓝在最前边,但是这几天跑的胶的小分子量条带不知怎的有在溴酚蓝前边的。所有条件都一样啊。我很纳闷啊。
8楼2014-05-16 18:45:04
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574759350

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cyk880606 at 2014-05-16 18:45:04
我的也出现过你这样的情况,后来你怎么解决了?我前几天跑的胶,溴酚蓝在最前边,但是这几天跑的胶的小分子量条带不知怎的有在溴酚蓝前边的。所有条件都一样啊。我很纳闷啊。...

最近我一直没做呢,我增加了一下分离胶的浓度还是这样,我觉得可能是配胶的缓冲液PH改变了,你可以重新调一下试试
9楼2014-05-20 10:54:34
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