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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是怎么回事?

本人是个新手,目前做蛋白电泳,有一些问题想请教一下大家。
    1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的?
    2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电泳的话怎么存放,放在4℃?下次电泳之前还用不用煮沸?
    3、稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃还是4℃?
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 12:06:15
都是用10%的分离胶,5%的浓缩胶。...

用15%的分离胶试一下
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
6楼2013-11-06 17:11:57
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 00:53:19
574759350: 金币+2, 有帮助 2013-11-06 08:18:13


1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的?
这个可能是因为你的蛋白分子量小,用15%的分离胶试一下,或者Tricine-SDS-PAGE试一下也可以。

2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电泳的话怎么存放,放在4℃?下次电泳之前还用不用煮沸?
最好放-20℃,下次电泳前融化混合均匀就可以上样了。

3、稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃还是4℃?
稀释处理好的蛋白Maker放在-20℃,最好分装成小管保存,防止反复冻融。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
2楼2013-11-05 22:03:51
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574759350

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-05 22:03:51


1、蛋白电泳目的条带跑到溴酚蓝前边是什么原因造成的?
这个可能是因为你的蛋白分子量小,用15%的分离胶试一下,或者Tricine-SDS-PAGE试一下也可以。

2、加入上样缓冲液煮沸好的蛋白样品如果过几天电 ...

溴酚蓝的位置大约在二十几KD的位置,很多蛋白条带都在它的前边,同样的样品以前跑的时候不是这种情况,这些蛋白条带都是在溴酚蓝后边的,不知道为什么?
3楼2013-11-06 08:20:58
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 574759350 at 2013-11-06 08:20:58
溴酚蓝的位置大约在二十几KD的位置,很多蛋白条带都在它的前边,同样的样品以前跑的时候不是这种情况,这些蛋白条带都是在溴酚蓝后边的,不知道为什么?...

你的分离胶浓度是多少,可能是你前后用的分离胶浓度不一样吧???
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
4楼2013-11-06 10:18:19
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