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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 低表达量的蛋白SDS-PAGE检测不出来，该用什么方法检测？
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

[求助] 低表达量的蛋白SDS-PAGE检测不出来，该用什么方法检测？ 已有4人参与

低表达量的蛋白SDS-PAGE检测不出来，该用什么方法检测？western blot 检测太贵了，有没有别的方法？
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1楼 2014-11-04 09:34:36
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
怎么没人啊？高手呢？
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2楼2014-11-04 10:07:09
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一砖头飘死: 金币+5, ★有帮助 2014-11-04 15:28:41
1. 如果是酶，可以测活
2.如果是抗原，还可以用免疫沉淀线电泳
3.ELISA检测
最关键还是要看你表达检测什么蛋白，还有western blot 检测应该很平常吧！
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成功源自于不断的努力和坚持
3楼2014-11-04 10:29:26
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jian520yi at 2014-11-04 10:29:26
1. 如果是酶，可以测活
2.如果是抗原，还可以用免疫沉淀线电泳
3.ELISA检测
最关键还是要看你表达检测什么蛋白，还有western blot 检测应该很平常吧！

我们实验室做不了，没有那套装置。我要检测的蛋白是种全局调控蛋白，不是酶，也不是抗原，所以你提议的方法都不行的，不过还是非常感谢！
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4楼2014-11-04 10:40:03
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一砖头飘死: 金币+25, ★★★很有帮助 2014-11-04 15:28:21
看主题进来的，原想建议你做mass spectrometry.
再看你说western blot贵，就不知道该给你什么建议了，呵呵。western blot已经是很普通、很便宜的方法了。
看你和3楼的对话。如果你对这个调控蛋白的上下游pathway做些研究，可以从这方面想想办法。比如，其下游基因表达水平也许可以间接反映这个蛋白的水平。这样的话，设计个引物，做个PCR试试。说实在的，我已经想不出能比这个还便宜的实验了。
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平等观诸法，悲心救世间。解彼真实性，得佛智慧光。
5楼2014-11-04 10:56:19
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一砖头飘死: 金币+5, ★有帮助 2014-11-04 15:28:50
银染是不是会好些  可以试试   WB实验很平常啊  可以去隔壁实验室借用下
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6楼2014-11-04 11:05:55
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by needle_ld at 2014-11-04 10:56:19
看主题进来的，原想建议你做mass spectrometry.
再看你说western blot贵，就不知道该给你什么建议了，呵呵。western blot已经是很普通、很便宜的方法了。
看你和3楼的对话。如果你对这个调控蛋白的上下游pathway ...

恩，这个想法真心可行啊！谢谢大神啊！关于那个western blot我也无力吐槽，毕竟我们学校实验室能力就有限，基本上都是做应用生产的，不做光研究性的课题，蛋白表达这块，永远只有过表，从来没低表，所以不知如何检测，是个头疼的问题
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7楼2014-11-04 15:26:28
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuhan131481 at 2014-11-04 11:05:55
银染是不是会好些  可以试试   WB实验很平常啊  可以去隔壁实验室借用下

其实我借遍了整个院的实验室都没有，我都无力吐槽了，不然我也不会纠结在此，都知道WB是最基础
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8楼2014-11-04 15:27:56
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caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酵母双杂交或者单杂交？用来检测调控蛋白的。

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9楼2014-11-08 12:24:58
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