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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

[求助] 低表达量的蛋白SDS-PAGE检测不出来,该用什么方法检测?已有4人参与

低表达量的蛋白SDS-PAGE检测不出来,该用什么方法检测?western blot 检测太贵了,有没有别的方法?
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

怎么没人啊?高手呢?
2楼2014-11-04 10:07:09
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
一砖头飘死: 金币+5, 有帮助 2014-11-04 15:28:41
1. 如果是酶,可以测活
2.如果是抗原,还可以用免疫沉淀线电泳
3.ELISA检测
最关键还是要看你表达检测什么蛋白,还有western blot 检测应该很平常吧!
成功源自于不断的努力和坚持
3楼2014-11-04 10:29:26
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jian520yi at 2014-11-04 10:29:26
1. 如果是酶,可以测活
2.如果是抗原,还可以用免疫沉淀线电泳
3.ELISA检测
最关键还是要看你表达检测什么蛋白,还有western blot 检测应该很平常吧!

我们实验室做不了,没有那套装置。我要检测的蛋白是种全局调控蛋白,不是酶,也不是抗原,所以你提议的方法都不行的,不过还是非常感谢!
4楼2014-11-04 10:40:03
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
一砖头飘死: 金币+25, ★★★很有帮助 2014-11-04 15:28:21
看主题进来的,原想建议你做mass spectrometry.
再看你说western blot贵,就不知道该给你什么建议了,呵呵。western blot已经是很普通、很便宜的方法了。
看你和3楼的对话。如果你对这个调控蛋白的上下游pathway做些研究,可以从这方面想想办法。比如,其下游基因表达水平也许可以间接反映这个蛋白的水平。这样的话,设计个引物,做个PCR试试。说实在的,我已经想不出能比这个还便宜的实验了。
平等观诸法,悲心救世间。解彼真实性,得佛智慧光。
5楼2014-11-04 10:56:19
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
一砖头飘死: 金币+5, 有帮助 2014-11-04 15:28:50
银染是不是会好些  可以试试   WB实验很平常啊  可以去隔壁实验室借用下
6楼2014-11-04 11:05:55
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by needle_ld at 2014-11-04 10:56:19
看主题进来的,原想建议你做mass spectrometry.
再看你说western blot贵,就不知道该给你什么建议了,呵呵。western blot已经是很普通、很便宜的方法了。
看你和3楼的对话。如果你对这个调控蛋白的上下游pathway ...

恩,这个想法真心可行啊!谢谢大神啊!关于那个western blot我也无力吐槽,毕竟我们学校实验室能力就有限,基本上都是做应用生产的,不做光研究性的课题,蛋白表达这块,永远只有过表,从来没低表,所以不知如何检测,是个头疼的问题
7楼2014-11-04 15:26:28
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yuhan131481 at 2014-11-04 11:05:55
银染是不是会好些  可以试试   WB实验很平常啊  可以去隔壁实验室借用下

其实我借遍了整个院的实验室都没有,我都无力吐槽了,不然我也不会纠结在此,都知道WB是最基础
8楼2014-11-04 15:27:56
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caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酵母双杂交或者单杂交?用来检测调控蛋白的。

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-11-08 12:24:58
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