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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化后培养基上的单菌落怎么那么少，还有卫星菌落
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)

[交流] 转化后培养基上的单菌落怎么那么少，还有卫星菌落 已有6人参与

转化后，在有氨苄青霉素的LB培养基上培养，一个板上只有几个菌落，还有一部分是卫星菌落，有的说是放在培养箱里久了就长成了卫星菌落，可有的说放再久也不会长成卫星菌落，如果是卫星菌落说是可能是污染的。一个板上不怎么也应该有300个单菌落吗？我的怎么只有几个。PCR后发现是我要的1600pb，但我怕是污染的。是不是链接的问题，时间短，效率低，只连接上了一小部分才出现这种情况啊。
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1楼 2015-06-09 22:07:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shiqili471

金虫 (小有名气)
★
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菌落PCR筛出阳性否，如果能做出来，应该没啥问题，只是转化效率低。
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5楼2015-06-10 19:10:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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既然已经成功得到阳性转化菌，为什么还要再做？

氨苄青霉素的抗性基因编码一个酶，被阳性转化菌分泌到胞外将菌所在地方的氨苄青霉素的酰胺环切开，培养的时间越久，酶扩散的范围越大，平板上的氨苄青霉素被破坏得就越多。氨苄青霉素抑制了阴性转化菌的生长，久了之后自然就会有阴性菌在阳性菌的周围长，形成卫星菌落了。

没必要担心
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2015-06-11 03:31:41
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2015-06-11 03:31:41
既然已经成功得到阳性转化菌，为什么还要再做？

氨苄青霉素的抗性基因编码一个酶，被阳性转化菌分泌到胞外将菌所在地方的氨苄青霉素的酰胺环切开，培养的时间越久，酶扩散的范围越大，平板上的氨苄青霉素被破坏得 ...

谢谢你，说的很明白，我懂了哦
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10楼2015-06-12 13:36:15
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Tama二等兵

新虫 (初入文坛)
★
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我们lb对应抗生素加量为千分之一，氨苄青霉素是抑菌不是杀菌，所以时间长了会有杂菌（小的卫星菌），挑单克隆时挑大的就好，长斑少除了是感受态效价不高，还有就是转化效率不高，很正常，前几天做top10,一百二十个培养皿只长了30多个，一死死一批，建议用感受态时同时做个阴性对照
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11楼2015-06-12 17:17:44
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普通回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)
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请问你涂板是怎么涂的，转化后直接涂布还是离心涂布的，或者涂布的量多大，连接一般连大概半小时就ok，
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2楼2015-06-09 22:11:25
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-06-09 22:11:25
请问你涂板是怎么涂的，转化后直接涂布还是离心涂布的，或者涂布的量多大，连接一般连大概半小时就ok，

直接涂板的，一个板加入了100微升
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3楼2015-06-09 23:58:49
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a13515517892

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱琪琪吉子77 at 2015-06-09 23:58:49
直接涂板的，一个板加入了100微升...

如果直接涂布的斑少，可以离心涂布
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4楼2015-06-10 08:23:59
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MrFat

铁虫 (初入文坛)
★
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氨苄在37度24小时肯定失效了，会长卫星菌落的～

你的阳性菌应该没问题～重新再新的氨卞板上划个线，长6-8小时再用～
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6楼2015-06-10 19:15:00
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zliean

金虫 (小有名气)
★
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氨苄培养超过12小时 氨苄慢慢失效就有卫星菌 ，12小时内的菌落是你的目的菌   再者你感受态不太好  重做把
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7楼2015-06-10 21:15:43
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zliean at 2015-06-10 21:15:43
氨苄培养超过12小时 氨苄慢慢失效就有卫星菌 ，12小时内的菌落是你的目的菌   再者你感受态不太好  重做把

谢谢啦
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8楼2015-06-11 00:24:16
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