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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于大肠杆菌涂板（含氨苄）培养的问题
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌涂板（含氨苄）培养的问题 已有5人参与

我用新配的培养基和天根的氨苄（100mg/ml）涂板培养大肠杆菌，做了对照试验，共5个板，2个不加氨苄，3个加氨苄，不加氨苄的一个直接涂的DH5α感受态细胞，一个涂的是以前长出过并且连接转化成功的菌；加氨苄的三个板一个还是直接涂感受态细胞（1号），一个是以前成功的菌（2号），还有一个是新转化的菌（3号）。培养16小时，结果没加氨苄的板都长了大片的菌，这说明培养基是正常的，而加了氨苄的板1号没有，2号有大片的菌，跟没涂氨苄的密度差不多，3号有零星的菌（4、5个吧），每个菌周围有那种小的卫星菌落。以前成功的菌和新转化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min，感受态细胞是加了800ul培养基后活化45min。这个结果是不是说明氨苄有问题呢，还是我在做培养基的时候氨苄没有加均匀，可是我加氨苄的时候培养基温度还算合适，而且也混匀了。
请教各位出现这个现象是什么原因，我上周的时候用实验室自己配的氨苄的时候12小时就长得很好了。这个12小时的时候菌落还比较小，时间长了就有卫星菌落。但是这个氨苄之前实验室其他人用过说是还算正常，但也需要培养较长时间。
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1楼 2014-04-28 16:22:36
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
你不是3个amp的板子么？其中2号不是涂的之前转化成功的么？连接是3号，对吧？
因为之前转化成功的菌，现在含有的就是质粒，每个细胞内都是有抗性的。
2号的菌落数应该远远大于3号，这个是没有问题的。

还是我理解你的问题有偏差，呵呵，都糊涂了
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我是蛋壳儿
20楼2014-05-07 03:21:59
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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我是蛋壳儿(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-28 19:48:54
"以前成功的菌和新转化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min"，不晓得你这个“之前”是多久以前，有可能是时间太长了吧，这对于卫星菌落的形成是有利的，另外你的结论貌似不能看出氨苄有问题.....
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只有不断地失败才会成功
2楼2014-04-28 17:10:06
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)
一周前左右转化的
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3楼2014-04-28 17:50:17
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-28 17:10:06
"以前成功的菌和新转化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min"，不晓得你这个“之前”是多久以前，有可能是时间太长了吧，这对于卫星菌落的形成是有利的，另外你的结论貌似不能看出氨苄有问题.....

一周之前左右转化的
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4楼2014-04-28 17:50:50
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zep616745243

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我是蛋壳儿 at 2014-04-28 17:50:50
一周之前左右转化的...

重新转化试试看吧
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只有不断地失败才会成功
5楼2014-04-28 18:06:35
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-28 18:06:35
重新转化试试看吧...

长的那些难道都是抗氨苄的菌么
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6楼2014-04-28 20:49:24
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zep616745243

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我是蛋壳儿 at 2014-04-28 20:49:24
长的那些难道都是抗氨苄的菌么...

可以挑取大菌落试试，卫星菌落一般都是空质粒吧，个人意见
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只有不断地失败才会成功
7楼2014-04-28 21:39:31
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-28 21:39:31
可以挑取大菌落试试，卫星菌落一般都是空质粒吧，个人意见...

谢谢
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8楼2014-04-28 22:04:43
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-05-03 10:56:39
我是蛋壳儿: 金币+1, ★有帮助 2014-05-04 21:23:08
氨苄应该没问题，转化后活化时间也没问题，我有时候活化2～3个小时。
氨苄抗性的质粒转化大肠，平板培养时间长了容易形成卫星菌落（建议不超过16～17小时），你可以涂板前在菌液里再加20uL氨苄（默认9cm平板，20mL平板），混匀后涂板。
不建议挑取有卫星菌的单菌落。
DH5α应该长较快，应该12个小时就可以挑单菌落了。
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9楼2014-04-29 04:19:34
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-05-03 10:57:00
我是蛋壳儿: 金币+1, ★有帮助 2014-05-04 21:19:18
从你的描述中看，板子应该没有问题，而且感受态没有污染，之前转化的菌涂板子，应该长大片的菌，没有问题，只是你转化的效率可能太低，卫星菌落一般都没有什么东西，如果就4-5个菌落，建议把中心的菌落挑过夜培养，然后提取质粒检验。
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10楼2014-04-29 08:03:42
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