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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助平板抑菌试验的技术问题
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助平板抑菌试验的技术问题

如题，最近在做一个抑菌试验，需要验证一种固体片状材料的抗菌性能，由于不是粉末或者可溶物质，采用什么试验手段成为我的一个小难题。通过文献查阅，确定的试验方案是：
因为是预实验，所以采用的固体材料都是不抗菌的，想要先试试方案是否可行
方案1，将固体材料放置于平板的固体培养基上，滴菌液（大肠杆菌），涂开，之后再分别滴0.5%琼脂的半固体培养基，0.25%琼脂的半固体培养基及液体培养基；

方案2，预先制备厚度约3mm的琼脂培养基。将固体材料消毒之后平放在培养皿内，滴菌液，涂开，之后从预先制备的琼脂培养基薄层切开适当大小，盖在菌液上；（之所以这样是因为如果是固体培养基滴在菌液上，培养基太粘稠，而且极易凝固）

以上两种方案之后，将培养皿（盖子在上面，非倒放）37度培养12-16小时。

结果第二天一看，按照方案一培养的，材料上看不到明显的菌斑，而材料周围的固体培养基上却有大量菌斑。仔细想来，应该是因为盖子在上，水分冷凝后可能滴到了材料上，冲散了滴液体培养基的菌液。但材料上半固体培养基里面为什么不长细菌呢，是时间不够长吗？
方案二，预先做好的琼脂培养基薄层，做了不同菌液浓度的，发现小浓度的有依稀的菌落生成，但是大浓度（10~5和10~7）却没有菌落和菌斑，实在是搞不懂。

啰嗦这么多，想要请有经验的虫子们教教我，我这抑菌试验到底该怎么做啊~~~~头大。。。。

（文献上讲，滴琼脂培养基时候，要点是温度，不能太高，否则细菌会烫死，也不能太低，要不就凝固了，这些我也都考虑到了，实在是。。。。不知道该怎么办）
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1楼 2011-01-10 10:12:09
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
★
baby1_9253344(金币+1):3Q 2011-01-10 10:59:45
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 12:07:24
培养基融化后 待冷却后将菌液混入其中，倒板，凝固后放入材料，培养待测
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2楼2011-01-10 10:55:43
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
baby1_9253344(金币+1):谢谢表扬，哈哈 2011-01-10 11:03:45
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 12:07:33
看完了，首先很欣赏你准备实验方案的过程，但是你的具体操作我没有看的太明白，估计用的是混菌法或双层琼脂法吧！我觉得如果是“固体片状材料”，可不可以利用像滤纸片法一样来做抑菌试验呢，你可以试试！祝实验顺利！
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3楼2011-01-10 11:00:19
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2011-01-10 10:55:43:
培养基融化后 待冷却后将菌液混入其中，倒板，凝固后放入材料，培养待测

如果这样操作，出来的效果是材料下方的固体培养基里不会有菌斑吗？
还有一个小小疑问，菌液混合在固体和半固体培养基中生长出的菌斑好像很小啊，这样拍照片出不来效果，是不是延长培养时间可以让菌斑长大呢
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4楼2011-01-10 11:03:04
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2011-01-10 11:00:19:
看完了，首先很欣赏你准备实验方案的过程，但是你的具体操作我没有看的太明白，估计用的是混菌法或双层琼脂法吧！我觉得如果是“固体片状材料”，可不可以利用像滤纸片法一样来做抑菌试验呢，你可以试试！祝实验顺 ...

怪我表述的啰嗦了，因为不是学生物的，不太专业，我的这个土方法貌似就是你说的双层琼脂法了，呵呵。我发觉好像把细菌包在琼脂里面长的比较慢，或者是因为限制扩散了，长的菌落比较小？因为想要抑菌和非抑菌的对比照片，所以想要大一点的菌落，那我是应该增加菌液密度还是应该延长培养时间呢？
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5楼2011-01-10 11:09:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)
你们实验室原来没有人做过吗？
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6楼2011-01-10 11:31:24
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-01-10 11:09:25:


怪我表述的啰嗦了，因为不是学生物的，不太专业，我的这个土方法貌似就是你说的双层琼脂法了，呵呵。我发觉好像把细菌包在琼脂里面长的比较慢，或者是因为限制扩散了，长的菌落比较小？因为想要抑菌和非抑菌的 ...

呵呵，说来话长呀，建议看一下微生物实验指导！
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7楼2011-01-10 11:31:33
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-10 11:31:24:
你们实验室原来没有人做过吗？

没有，从来也没有。。。呵呵，要不然我也不能这么无助啊。。。
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8楼2011-01-10 11:37:43
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
baby1_9253344(金币+1): 2011-01-16 11:12:50
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-01-10 11:03:04:

如果这样操作，出来的效果是材料下方的固体培养基里不会有菌斑吗？
还有一个小小疑问，菌液混合在固体和半固体培养基中生长出的菌斑好像很小啊，这样拍照片出不来效果，是不是延长培养时间可以让菌斑长大呢

可以不在培养基中混入菌液，而是将材料放在培养基平板上1-2d，然后再涂板，这样效果会不会好些？
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9楼2011-01-15 16:40:40
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2011-01-15 16:40:40:

可以不在培养基中混入菌液，而是将材料放在培养基平板上1-2d，然后再涂板，这样效果会不会好些？

这个我也想过，不过如果这样，材料上面涂的菌液没有营养源啊
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10楼2011-01-16 11:13:35
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lmy0459

新虫 (初入文坛)
更换方法。
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11楼2012-03-18 20:00:24
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lmy0459

新虫 (初入文坛)
更换方法。
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12楼2012-03-18 20:01:22
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lingling安农

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也做抑菌实验的，待琼脂跟在大拇指与食指之间检测，这个部位比较敏感，这时不烫的话就可以加指示菌了，不会烫死的
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13楼2013-03-14 14:46:18
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