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baby1_9253344

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】求助平板抑菌试验的技术问题

如题,最近在做一个抑菌试验,需要验证一种固体片状材料的抗菌性能,由于不是粉末或者可溶物质,采用什么试验手段成为我的一个小难题。通过文献查阅,确定的试验方案是:
因为是预实验,所以采用的固体材料都是不抗菌的,想要先试试方案是否可行
方案1,将固体材料放置于平板的固体培养基上,滴菌液(大肠杆菌),涂开,之后再分别滴0.5%琼脂的半固体培养基,0.25%琼脂的半固体培养基及液体培养基;

方案2,预先制备厚度约3mm的琼脂培养基。将固体材料消毒之后平放在培养皿内,滴菌液,涂开,之后从预先制备的琼脂培养基薄层切开适当大小,盖在菌液上;(之所以这样是因为如果是固体培养基滴在菌液上,培养基太粘稠,而且极易凝固)

以上两种方案之后,将培养皿(盖子在上面,非倒放)37度培养12-16小时。

结果第二天一看,按照方案一培养的,材料上看不到明显的菌斑,而材料周围的固体培养基上却有大量菌斑。仔细想来,应该是因为盖子在上,水分冷凝后可能滴到了材料上,冲散了滴液体培养基的菌液。但材料上半固体培养基里面为什么不长细菌呢,是时间不够长吗?
方案二,预先做好的琼脂培养基薄层,做了不同菌液浓度的,发现小浓度的有依稀的菌落生成,但是大浓度(10~5和10~7)却没有菌落和菌斑,实在是搞不懂。

啰嗦这么多,想要请有经验的虫子们教教我,我这抑菌试验到底该怎么做啊~~~~头大。。。。

(文献上讲,滴琼脂培养基时候,要点是温度,不能太高,否则细菌会烫死,也不能太低,要不就凝固了,这些我也都考虑到了,实在是。。。。不知道该怎么办)
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)



baby1_9253344(金币+1):3Q 2011-01-10 10:59:45
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 12:07:24
培养基融化后 待冷却后将菌液混入其中,倒板,凝固后放入材料,培养待测
2楼2011-01-10 10:55:43
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)



baby1_9253344(金币+1):谢谢表扬,哈哈 2011-01-10 11:03:45
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 12:07:33
看完了,首先很欣赏你准备实验方案的过程,但是你的具体操作我没有看的太明白,估计用的是混菌法或双层琼脂法吧!我觉得如果是“固体片状材料”,可不可以利用像滤纸片法一样来做抑菌试验呢,你可以试试!祝实验顺利!
3楼2011-01-10 11:00:19
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2011-01-10 10:55:43:
培养基融化后 待冷却后将菌液混入其中,倒板,凝固后放入材料,培养待测

如果这样操作,出来的效果是材料下方的固体培养基里不会有菌斑吗?
还有一个小小疑问,菌液混合在固体和半固体培养基中生长出的菌斑好像很小啊,这样拍照片出不来效果,是不是延长培养时间可以让菌斑长大呢
4楼2011-01-10 11:03:04
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by srlee at 2011-01-10 11:00:19:
看完了,首先很欣赏你准备实验方案的过程,但是你的具体操作我没有看的太明白,估计用的是混菌法或双层琼脂法吧!我觉得如果是“固体片状材料”,可不可以利用像滤纸片法一样来做抑菌试验呢,你可以试试!祝实验顺 ...

怪我表述的啰嗦了,因为不是学生物的,不太专业,我的这个土方法貌似就是你说的双层琼脂法了,呵呵。我发觉好像把细菌包在琼脂里面长的比较慢,或者是因为限制扩散了,长的菌落比较小?因为想要抑菌和非抑菌的对比照片,所以想要大一点的菌落,那我是应该增加菌液密度还是应该延长培养时间呢?
5楼2011-01-10 11:09:25
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你们实验室原来没有人做过吗?
6楼2011-01-10 11:31:24
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-01-10 11:09:25:


怪我表述的啰嗦了,因为不是学生物的,不太专业,我的这个土方法貌似就是你说的双层琼脂法了,呵呵。我发觉好像把细菌包在琼脂里面长的比较慢,或者是因为限制扩散了,长的菌落比较小?因为想要抑菌和非抑菌的 ...

呵呵,说来话长呀,建议看一下微生物实验指导!
7楼2011-01-10 11:31:33
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-10 11:31:24:
你们实验室原来没有人做过吗?

没有,从来也没有。。。呵呵,要不然我也不能这么无助啊。。。
8楼2011-01-10 11:37:43
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)


baby1_9253344(金币+1): 2011-01-16 11:12:50
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-01-10 11:03:04:

如果这样操作,出来的效果是材料下方的固体培养基里不会有菌斑吗?
还有一个小小疑问,菌液混合在固体和半固体培养基中生长出的菌斑好像很小啊,这样拍照片出不来效果,是不是延长培养时间可以让菌斑长大呢

可以不在培养基中混入菌液,而是将材料放在培养基平板上1-2d,然后再涂板,这样效果会不会好些?
9楼2011-01-15 16:40:40
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2011-01-15 16:40:40:

可以不在培养基中混入菌液,而是将材料放在培养基平板上1-2d,然后再涂板,这样效果会不会好些?

这个我也想过,不过如果这样,材料上面涂的菌液没有营养源啊
10楼2011-01-16 11:13:35
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lmy0459

新虫 (初入文坛)


更换方法。
11楼2012-03-18 20:00:24
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lmy0459

新虫 (初入文坛)


更换方法。
12楼2012-03-18 20:01:22
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lingling安农

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也做抑菌实验的,待琼脂跟在大拇指与食指之间检测,这个部位比较敏感,这时不烫的话就可以加指示菌了,不会烫死的
13楼2013-03-14 14:46:18
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