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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌涂板(含氨苄)培养的问题 已有5人参与

我用新配的培养基和天根的氨苄(100mg/ml)涂板培养大肠杆菌,做了对照试验,共5个板,2个不加氨苄,3个加氨苄,不加氨苄的一个直接涂的DH5α感受态细胞,一个涂的是以前长出过并且连接转化成功的菌;加氨苄的三个板一个还是直接涂感受态细胞(1号),一个是以前成功的菌(2号),还有一个是新转化的菌(3号)。培养16小时,结果没加氨苄的板都长了大片的菌,这说明培养基是正常的,而加了氨苄的板1号没有,2号有大片的菌,跟没涂氨苄的密度差不多,3号有零星的菌(4、5个吧),每个菌周围有那种小的卫星菌落。以前成功的菌和新转化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min,感受态细胞是加了800ul培养基后活化45min。这个结果是不是说明氨苄有问题呢,还是我在做培养基的时候氨苄没有加均匀,可是我加氨苄的时候培养基温度还算合适,而且也混匀了。
请教各位出现这个现象是什么原因,我上周的时候用实验室自己配的氨苄的时候12小时就长得很好了。这个12小时的时候菌落还比较小,时间长了就有卫星菌落。但是这个氨苄之前实验室其他人用过说是还算正常,但也需要培养较长时间。
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

你不是3个amp的板子么?其中2号不是涂的之前转化成功的么?连接是3号,对吧?
因为之前转化成功的菌,现在含有的就是质粒,每个细胞内都是有抗性的。
2号的菌落数应该远远大于3号,这个是没有问题的。

还是我理解你的问题有偏差,呵呵,都糊涂了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

20楼2014-05-07 03:21:59
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我是蛋壳儿(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-28 19:48:54
"以前成功的菌和新转化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min",不晓得你这个“之前”是多久以前,有可能是时间太长了吧,这对于卫星菌落的形成是有利的,另外你的结论貌似不能看出氨苄有问题.....
只有不断地失败才会成功
2楼2014-04-28 17:10:06
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)

一周前左右转化的
3楼2014-04-28 17:50:17
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-28 17:10:06
"以前成功的菌和新转化的菌都是之前涂板剩下的菌在涂板前活化了45min",不晓得你这个“之前”是多久以前,有可能是时间太长了吧,这对于卫星菌落的形成是有利的,另外你的结论貌似不能看出氨苄有问题.....

一周之前左右转化的
4楼2014-04-28 17:50:50
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zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我是蛋壳儿 at 2014-04-28 17:50:50
一周之前左右转化的...

重新转化试试看吧
只有不断地失败才会成功
5楼2014-04-28 18:06:35
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-28 18:06:35
重新转化试试看吧...

长的那些难道都是抗氨苄的菌么
6楼2014-04-28 20:49:24
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zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我是蛋壳儿 at 2014-04-28 20:49:24
长的那些难道都是抗氨苄的菌么...

可以挑取大菌落试试,卫星菌落一般都是空质粒吧,个人意见
只有不断地失败才会成功
7楼2014-04-28 21:39:31
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我是蛋壳儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-28 21:39:31
可以挑取大菌落试试,卫星菌落一般都是空质粒吧,个人意见...

谢谢
8楼2014-04-28 22:04:43
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-05-03 10:56:39
我是蛋壳儿: 金币+1, 有帮助 2014-05-04 21:23:08
氨苄应该没问题,转化后活化时间也没问题,我有时候活化2~3个小时。
氨苄抗性的质粒转化大肠,平板培养时间长了容易形成卫星菌落(建议不超过16~17小时),你可以涂板前在菌液里再加20uL氨苄(默认9cm平板,20mL平板),混匀后涂板。
不建议挑取有卫星菌的单菌落。
DH5α应该长较快,应该12个小时就可以挑单菌落了。
9楼2014-04-29 04:19:34
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-05-03 10:57:00
我是蛋壳儿: 金币+1, 有帮助 2014-05-04 21:19:18
从你的描述中看,板子应该没有问题,而且感受态没有污染,之前转化的菌涂板子,应该长大片的菌,没有问题,只是你转化的效率可能太低,卫星菌落一般都没有什么东西,如果就4-5个菌落,建议把中心的菌落挑过夜培养,然后提取质粒检验。
10楼2014-04-29 08:03:42
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