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terry_pan

铜虫 (初入文坛)

[求助] 各位做大肠杆菌发酵的朋友看过来,这到底是什么问题?已有5人参与

事情是这样的,公司有个重组大肠杆菌表达胰岛素的项目,原本发酵都正常,但最近一个月来一直出问题,而且是同一个问题,上5L罐培养4h后OD就不上升,反倒下降,领导说可能染噬菌体,但涂板也未发现有溶菌圈,很纳闷,哪位大神告诉我下这到底是什么问题
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大肠杆菌工程菌发酵

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小小的天,有大大的梦想
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fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
涂平板,活化一下菌种。
2楼2013-06-19 15:37:37
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terry_pan

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuding6 at 2013-06-19 15:37:37
涂平板,活化一下菌种。

平板是涂了,但没有看到溶菌圈,你说的活化下菌种到底是什么目的,因为我每次都是甘油管接新鲜平板,菌应该生长状态还是没什么问题的吧,求指教
小小的天,有大大的梦想
3楼2013-06-19 17:24:25
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fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们也出现过你说的情况,发酵12h后OD值越来越低,刚开始我们也以为是噬菌体感染,但用平板筛查,没有噬菌斑,于是我们把保存的菌种重新涂平板挑单克隆,再做发酵就正常了。或者重新转化一下。
4楼2013-06-19 23:11:44
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普通回帖

miniwang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换培养基或改变其质量
5楼2013-06-19 23:17:01
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wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你先观察一下,你的菌种保存了多久,一般大肠杆菌,只要保存时间不长,应该问题不大,既然染噬菌体的可能性不大,就应该从种子本身去寻找原因了
6楼2013-06-20 08:38:28
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xiejinhui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
教你一招,你上罐后不要管他,即使OD下降了也不要管他,继续培养,到第二天你会发现菌体自然就上去了,并且你的菌体表达量还相当的不错。
7楼2013-06-20 15:09:06
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carot

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
种子有没有定期活化保存 像是菌种退化导致的
8楼2013-06-21 13:01:46
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bobonn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该不会是染噬菌体,图平板,挑单菌。活化菌种就好了。我们原来遇到到过这种情况,不过解决了。但是现在有时候还会出现,菌体疯长,但是单位很低甚至不产单位的情况,偶尔出现,到现在没解决
9楼2013-06-25 09:03:56
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vividez

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by bobonn at 2013-06-25 09:03:56
应该不会是染噬菌体,图平板,挑单菌。活化菌种就好了。我们原来遇到到过这种情况,不过解决了。但是现在有时候还会出现,菌体疯长,但是单位很低甚至不产单位的情况,偶尔出现,到现在没解决

会不会是质粒丢失 引起菌体疯长?
10楼2013-07-03 08:24:39
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