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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵罐小试问题
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potential8707

木虫 (初入文坛)

[求助] 发酵罐小试问题

我做的是大肠杆菌的发酵罐，单位里的大罐已经在生产了，让我做5L的小罐，我也是第一次做，但总是做不到生产上的要求，想在这求助下。
生产上最后发酵液的pH在8.0以上，OD在5.5以上，可我现在将接种量提高了两倍，转数为250 rpm，风量10 SCFH（1 L/min=2.12 SCFH），最后发酵结束后，pH能达标，但是OD远远不行，想问下是不是风量太大了，我下面要怎么改善啊
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大肠杆菌工程菌发酵

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1楼 2012-10-16 08:40:34
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:06
potential8707: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 14:47:17
zhangxingc: 回帖置顶 2013-02-19 12:39:13
我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小时稍微加大点通气量，同事慢慢100  100的调转速，直到最终转速到1000  ，这个过程只是一个大概的过程。因为你们那边好像没有溶氧电极。
另外大肠杆菌没有那么脆弱，小罐上的拿点剪切力还是可以承受的，楼上的如果没做过大肠杆菌发酵请不要根据自己的想法误导别人
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potential8707 potential8707
19楼2012-10-19 13:09:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:13
你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵，蛋白胨直接发酵罐灭菌，葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液（这个没太多要求，溶解了就可以 115℃灭菌20分钟），就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先生长起来，再利用慢速碳源 玉米浆，玉米浆组要提供碳源，如果对补加多少氮源没数，可以将氮源配成溶液用补料瓶慢慢流加，细菌应该不难长
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21楼2012-10-19 13:25:27
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zys1256

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠长到5都成问题，我们大肠随便长长都是一百多的OD
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12楼2012-10-18 18:15:40
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

看了你的培养基配方了，接种量太少了，发酵罐一般5%-10%接种，0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵，会不会是因为大罐的散热系统做的不好，一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆，你怎么确定你的菌浓。
还有一点就是你培养基氮源基本没有，参考别的文献，建议你氮源可以 添加 无机氮源硫酸铵 或者 条件好 添加蛋白胨 或者 氨水 或者 硝酸钾 或者大豆粉。
之前你说你添加氮源，OD好一点了，可能是你的氮源添加的太少了 ，蛋白胨等有机氮源添加 1%的量试一下。
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20楼2012-10-19 13:20:53
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by potential8707 at 2012-10-19 10:31:04
培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了...

1、你的磷酸盐含量太低(只有1.7g/L)，尽管玉米浆这个东东可以提供一些磷酸盐，但是如果补料中没有磷酸盐的话，菌体密度高不起来；
2、你最好用一些酸性蛋白酶把玉米浆处理一下，否则利用率太低了；
3、硫酸镁量低，相当于0.3g/L，比较贫瘠的M9培养基里面都比这个高；
4、接种量有些少……
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我笃信:人定胜天！
23楼2012-10-19 14:15:44
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

培养基中的玉米浆可以提供氮源，但是如果不水解的话就有限了……
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我笃信:人定胜天！
24楼2012-10-19 14:17:33
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhangxingc: 金币+8, 鼓励持续应助 2013-02-19 18:54:23
这个是网上搜到的一种工业上生产枯草芽孢杆菌的配方：
1、葡萄糖10 g/L、玉米粉8 g/L、豆粕粉25 g/L、硫酸锰30.8 mg/L、硫酸镁5 g/L、磷酸二氢钠0.52 g/L、磷酸氢二钠2.33 g/L

2、马铃薯200 g,蔗糖20 g,葡萄糖10 g,硫酸镁5 g,酵母膏20 g,硫酸锰30.8 mg,磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钠0 后面的显示不全

你可以大概上参考一下，然后变换一下： 葡萄糖10g/L 玉米浆 20g/L 硫酸镁 5g/L  磷酸二氢钠0.52 g/L、磷酸氢二钠2.33 g/L 酵母膏或者蛋白胨20 g/L，初始pH调整为7，再添加你的富马酸，结果应该比现在好一点。  （葡萄糖作为速效C源、玉米浆作为慢速或者廉价碳源、磷酸盐可以一定程度上调节pH，不过这个作用可能不是很明显 酵母膏或者蛋白胨可以当做N源，如果工业发酵想降低成本，这个可以用大豆粕代替 培养基还可以改进 比如添加一些Fe盐或者 发酵后期流加 N源 或者 碳源 ，这个就是后期工作了）
还可以添加5g/L是碳酸钙，那个对调节pH有一定帮助
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35楼2012-10-25 15:34:38
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普通回帖

wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-10-16 20:50:14
小罐和大罐是有区别的，
你的大罐条件是什么样的？？
一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
关系到溶氧问题和保温稳定等情况
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2楼2012-10-16 12:56:26
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨
★
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-10-16 20:50:23
接种量并不是越大越好，有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长，保持原样试试。
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希望大家多多交流。
3楼2012-10-16 14:30:41
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wzq_ing at 2012-10-16 12:56:26
小罐和大罐是有区别的，
你的大罐条件是什么样的？？
一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
关系到溶氧问题和保温稳定等情况

大罐的转数40rpm，风量400m3/h，我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十，之后会下降，温度用的跟大罐一样的，41℃。
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4楼2012-10-16 15:21:59
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2012-10-16 14:30:41
接种量并不是越大越好，有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长，保持原样试试。

之前试过，结果连pH也没能达标，pH最高升到7.5-7.6，之后就升不上去了。
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5楼2012-10-16 15:22:57
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jimmyp

铁虫 (小有名气)
加大氮源试试
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6楼2012-10-16 19:20:34
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jimmyp at 2012-10-16 19:20:34
加大氮源试试

是不是因为我加大了接种量，营养不够了呀
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7楼2012-10-16 20:54:10
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by potential8707 at 2012-10-16 15:21:59
大罐的转数40rpm，风量400m3/h，我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十，之后会下降，温度用的跟大罐一样的，41℃。...

既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源是可以导致发酵液偏碱的，
接种量也是不要无限增大，在合理的范围就行了
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8楼2012-10-17 08:37:16
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:26
溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵液体积比设为1:1或者通气量更高一点也可以。如果是玻璃罐体还要保证罐内压力为一个大气压（玻璃罐体不耐压，不锈钢的应该没多大问题），还有你的OD600怎么会只有5.5，这也太低了吧。拿普通的营养肉汤或者LB都不止这个啊。接种量5%就差不多了。
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9楼2012-10-17 10:42:45
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:35
1、你的培养基配方？
2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……
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10楼2012-10-17 15:29:29
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